WWW.DOC.KNIGI-X.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Различные документы
 

«(51) МПК A01G 7/00 (2006.01) ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ, ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ (12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ...»

RU 2 406 293 C2

(19) (11) (13)

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

(51) МПК

A01G 7/00 (2006.01)

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА

ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,

ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ (21), (22) Заявка: 2007146252/21, 14.12.2007 (72) Автор(ы):

Воронкова Татьяна Владимировна (RU), (24) Дата начала отсчета срока действия патента: Шелепова Ольга Владимировна (RU) 14.12.2007 (73) Патентообладатель(и):

(43) Дата публикации заявки: 20.06.2009 Воронкова Татьяна Владимировна (RU), RU Шелепова Ольга Владимировна (RU) (45) Опубликовано: 20.12.2010 Бюл. № 35 (56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: Определение растворимых углеводов фотометрически с пикриновой кислотой (модификация Соловьева). Практикум по агрохимии, под редакцией акад. РАСХН Минеева В.Г. - М.: Изд-во МГУ, 2001, 2-изд., с.419-422. Определение крахмала в растениях методом кислотного гидролиза. Практикум по агрохимии, под редакцией Ягодина Б.А. М.: Агропромиздат, 1987, с.191-197. SU 1176246 А, 30.08.1985. SU 996936 А, 15.02.1983.

C2

Адрес для переписки:

C2 127018, Москва, ул. Октябрьская, 35, кв.137, Т.В. Воронковой

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ВОДОРАСТВОРИМЫХ УГЛЕВОДОВ И



КРАХМАЛА ИЗ ОДНОЙ НАВЕСКИ

(57) Реферат: водным раствором измельченной навески с Способ определения водорастворимых последующим центрифугированием и углеводов и крахмала из одной навески кислотным гидро

–  –  –

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений для изучения углеводного статуса тканей и органов растений в онтогенезе; в пищевой и фармацевтической промышленности для оценки качества урожая и лекарственного сырья по содержанию крахмала и растворимых сахаров.

Аналогами способа определения водорастворимых углеводов и крахмала из одной навески являются следующие методики.

1. Определение растворимых углеводов фотометрически с пикриновой кислотой (модификация Соловьева): Практикум по агрохимии // Под редакцией акад. РАСХН Минеева В.Г. - М.: Изд-во МГУ, 2001. 2-изд. С.419-422.

2. Определение крахмала в растениях методом кислотного гидролиза: Практикум по агрохимии // Под редакцией Ягодина Б.А. - М.: Агропромиздат, 1987. С.191-197.

В ходе роста, развития, созревания, послеуборочного дозревания и хранения сельскохозяйственной продукции растворимые (сахара) и нерастворимые (крахмал) углеводы претерпевают взаимные превращения, вследствие чего важно для оценки качества продукции одновременно определять количество обоих компонентов.

Методика №1 позволяет определять только содержание растворимых углеводов, в то время как методика №2 - только содержание крахмала.

Предлагаемый способ позволяет определять в одной навеске растительного материала количество моносахаров, сумму водорастворимых углеводов и количество крахмала, что ранее было невозможно. Данная методика сравнительно проста, быстра и надежна.

Среди углеводов различают моносахариды, дисахариды и полисахариды.

Моносахариды хорошо растворимы в воде. Ди- и полисахариды образуются из моносахаридов в процессе полимеризации. Большинство из них (вплоть до инулина) также хорошо растворимы в воде. Крахмал нерастворим в воде или образует коллоидные растворы.





Одновременное определение разных форм углеводов в растительном материале открывает более широкие возможности для установления закономерностей обмена этих веществ при вегетативном росте, формировании урожая, созревании и хранении сельскохозяйственной продукции, а также при адаптации растений в новых условиях произрастания и выживания в неблагоприятных условиях среды.

Ход работы Из анализируемого растительного материала формируют среднюю пробу, из которой выделяют навеску массой 2-5 г, в зависимости от ожидаемого содержания углеводов, измельчают в ступке до однородной массы с добавлением дистиллированной воды, переносят в колбу емкостью 100 мл, доливают до половины дистиллированной водой и ставят на водяную баню. Экстракцию ведут при 40-50°С в течение 1 часа.

После экстракции растворимых углеводов проводят осаждение белков в растворе.

Для этого при анализе зерна и зеленых частей растений в колбу с экстрактом 45 приливают 5-6 капель 10%-ного уксуснокислого свинца и 12-14 капель насыщенного раствора Na2SO4, тщательно перемешивают и оставляют на 20 мин для созревания осадка, затем доводят до метки дистиллированной водой.

После осаждения белков одержимое колбы переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин при 4000 g (об./мин). Надосадочную жидкость переливают в чистую колбу емкостью 100 мл. Осадок, сформировавшийся после центрифугирования, тщательно переносят в другую колбу емкостью 100 мл, приливают 50 мл 2%-ного НСl и ставят в кипящую водяную баню на 1,5-2 часа для.: 3

–  –  –

гидролиза крахмала. Окончание гидролиза устанавливают по отсутствию синего окрашивания гидролизуемого раствора с раствором йода в KJ: для проверки берут 2-3 капли гидролизата и добавляют 1 каплю раствора йода.

По окончании гидролиза крахмала повторно проводят осаждение белков 10%-ным уксуснокислым свинцом, доливают дистиллированной водой до метки и оставляют на 20 мин для созревания осадка.

Фильтруют раствор через бумажный фильтр средней плотности в колбу на 100 мл.

Определение моносахаридов В сухую химическую пробирку емкостью 20-40 см 3 берут пипеткой 1-3 см 3 надосадочной жидкости (аликвоту), полученной после центрифугирования (в зависимости от ожидаемого количества водорастворимых углеводов). Если аликвота менее 3 см 3, то до этого объема доводят дистиллированной водой.

В пробирку приливают 3 см 3 насыщенного раствора пикриновой кислоты и 3 см 3 20%-ного раствора На2СО3 (соотношение компонентов 1:1:1), тщательно перемешивают и ставят пробирку в кипящую водяную баню на 30 мин. Уровень воды должен быть не ниже 2/3 высоты объема смеси в пробирках.

Через 30 мин пробирки вынимают и охлаждают, содержимое пробирок через воронку без фильтра переносят в мерные колбы на 50 см 3, ополаскивая несколько раз пробирки дистиллированной водой. Содержимое колбочек доводят до метки дистиллированной водой. Раствор колориметрируют (спектрофотометрируют) при длине волны 490 нм.

Контрольный раствор готовят одновременно. В колбу 100 см 3 наливают 50 см 3 дистиллированной воды, добавляют 0,7 см 3 уксуснокислого свинца и 1,4 см насыщенного раствора Na2SO4, доводят до метки дистиллированной водой. Из колбы берут 3 см раствора в пробирку, приливают 3 см насыщенного раствора пикриновой кислоты и 3 см 3 20%-ного раствора Na2CO3, перемешивают, выдерживают 30 мин в кипящей водяной бане. Охлаждают и переносят в мерную колбу на 50 см 3. Раствор, полученный таким образом, используют как раствор сравнения при колориметрировании.

Расчет:

где С - количество глюкозы по графику, мг; Р - разведение (100/3); Н - навеска материала, г.

Определение суммы водорастворимых углеводов В сухую пробирку пипеткой берут 1 см 3 надосадочной жидкости, полученной после центрифугирования, прибавляют 1 см 3 10%-ного раствора НС1 и ставят в кипящую водяную баню на 5 мин для гидролиза полисахаридов. После окончания гидролиза содержимое пробирок охлаждают, добавляют 1 см 3 20%-ного раствора Na2CO3 для нейтрализации соляной кислоты. Добавляют в пробирку 3 см 3 насыщенного раствора пикриновой кислоты и 3 см 3 20%-ного раствора Nа2СО3, перемешивают. Ставят пробирку в кипящую водяную баню на 30 мин, охлаждают, через воронку без фильтра переносят в мерную колбу на 50 см 3, доводят до метки дистиллированной водой, колориметрируют при 490 нм.

Сумма водорастворимых углеводов рассчитывается по формуле, приведенной выше.

–  –  –

Количество полисахаридов определяется по разнице: содержание полисахаридов (%) = (сумма водорастворимых углеводов % минус содержание моносахаридов %)0,95, где 0,95 - коэффициент пересчета глюкозы в полисахариды.

Определение содержания крахмала В сухую химическую пробирку пипеткой берут 1-3 см 3 фильтрата, полученного после гидролиза крахмала (в зависимости от ожидаемого количества). Если аликвота менее 3 см 3, то до этого объема доводят дистиллированной водой. Далее поступают как при определении моносахаридов.

Содержание крахмала определяют по формуле:

где С - количество глюкозы по графику, мг; Р - разведение (100/3); Н - навеска материала, г; К - коэффициент пересчета глюкозы в крахмал.

Построение калибровочного графика 1 г высушенной в течение 2 ч при температуре 60-70°С глюкозы растворяют в 1 дм дистиллированной воды. Для построения графика набирают в пробирки 0,2; 0,4;

0,6; 0,8; 1,0; 1,2; 1,4; 1,6; 1,8; 2,0; 2,2; 2,4; 2,6 см 3 стандартного раствора, доводят до 3 см 3 водой и далее поступают так же, как в случае определения моносахаридов. При построении графика и колориметрировании углеводов сравнение ведут по контрольному раствору.

Реактивы

1. Насыщенный раствор пикриновой кислоты: 20-30 г пикриновой кислоты заливают примерно 500 см 3 дистиллированной воды. Тщательно перемешивают в течение 5-10 мин. Для работы из этого объема отфильтровывают необходимое количество надосадочной жидкости, а в исходный раствор периодически доливают воду, до тех пор, пока на дне есть осадок не растворившейся пикриновой кислоты.

Раствор в емкости из темного стекла хранится неопределенно долго.

2. 20%-ный раствор Na2CO3: 200 г соды растворяют в 800 см 3 дистиллированной воды, после растворения соды раствор фильтруют.

3. 10%-ный раствор РbСН3СООН: 10 г уксуснокислого свинца растворяют в 100 см 3 дистиллированной воды.

4. 10%-ный раствор НС1: 236,8 см 3 концентрированной НСl (d=1,19) выливают в мерную колбу объемом 1 дм 3, предварительно налив туда 500 см 3 воды, доводят до метки.

5. 2%-ный раствор НС1: 45,2 см 3 концентрированной НСl выливают в мерную колбу объемом 1 дм 3, предварительно налив туда 500 см 3 воды, доводят до метки.

6. Насыщенный раствор Na2SO4: 165 г Na2SO4 растворяют в 1 дм 3 дистиллированной воды.

Для апробации предлагаемого способа определения водорастворимых углеводов и крахмала из одной навески был проанализирован усредненный образец из запасающих чешуи луковиц Tulipa bifloriformis L. (образцы отобраны осенью 2003 г.) в 5-кратной повторности. Полученные результаты статистически обработаны и представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Содержание моносахаридов, водорастворимых полисахаридов и крахмала в луковицах Tulipa bifloriformis L. в 1 мг/г сухого вещества.

–  –  –

Результаты, приведенные в табл. 1 и 2, свидетельствуют, что предлагаемый способ определения водорастворимых углеводов и крахмала из одной навески может применяться в качестве унифицированного метода при работе с растительными объектами. Статистические характеристики предлагаемого способа свидетельствуют о надежности и воспроизводимости результатов анализа.

Применение предлагаемого способа определения водорастворимых углеводов и крахмала из одной навески позволило провести одновременное определение разных форм углеводов в растительном материале таких объектов, как лапчатка белая (Potentilla alba L), шалфей мускатный (Salvia Sclarea L.), подснежник снежный (Galanthus nivalis L.), дикие виды и культурные сорта тюльпанов.

Результаты.: 6 RU 2 406 293 C2 этих исследований опубликованы в следующих работах:

1. Воронкова Т.В. Пул запасных углеводов и элементы анатомического строения зимующих растений шалфея мускатного // VI съезд об-ва физиологов растений России.

Матер. Международн. научн. конф. «Современная физиология растений: от молекул до экосистем». Ч.2. Сыктывкар, Респ. Коми, 2007. С.79-81.

2. Воронкова Т.В., Семенова М.В., Олехнович Л.С. Динамика фитогормонов и углеводов в луковичных чешуях подснежника снежного (Galanthus nivalis L.) в зимний период при интродукции в Средней полосе России // Матер. Международн. научн.

конф. «Теоретические и прикладные аспекты интродукции растений как перспективного направления развития науки и народного хозяйства» Т.2. Минск:

Эдит В.В, 2007. С.107-109.

3. В.В.Кондратьева, О.В.Шелепова, Т.В.Воронкова, Н.Н.Данилина. Физиологобиохимические основы многоцветковости у различных групп и сортов культурных и видовых тюльпанов. // Матер. V Международн. научной конференции «Цветоводство без границ». Харьков, 2006. С.66-69.

4. Шелепова О.В., Воронкова Т.В. Динамика углеводного обмена, баланса элементов минерального питания и анатомическое строение корневищ Potentilla alba L.

в процессе зимовки // Матер. Международн. научн. конф. «Теоретические и прикладные аспекты интродукции растений как перспективного направления развития науки и народного хозяйства». Т.2. Минск: Эдит В.В, 2007. С.166-167.

Формула изобретения Способ определения водорастворимых углеводов и крахмала из одной навески растительного материала, основанный на термической экстракции водным раствором измельченной навески с последующим центрифугированием и кислотным гидролизом осадка, содержащего крахмал, при этом определение содержания углеводов проводится в двух растворах: в надосадочной жидкости - водорастворимых углеводов, и в растворе после гидролиза осадка - крахмала, колориметрически по интенсивности изменения окраски вследствие химического взаимодействия углеводов с пикриновой кислотой в щелочной среде при нагревании в кипящей водяной бане, а расчет ведется по калибровочному графику в сравнении с контрольным раствором.

.: 7

Похожие работы:

«ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ "СТАВРОПОЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ" МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ КАФЕДРА ФАКУЛЬТЕТСКОЙ ПЕДИАТРИИ...»

«Современные методы и модели в преподавании иностранных языков 221 4. Медведева С.В. Из опыта работы с китайскими учащимися на начальном этапе обучения русскому языку // Актуальные...»

«Инструкция по применению лекарственного препарата для медицинского применения ВЕЛКЕЙД® (VELCADE®) Регистрационный номер – Торговое название препарата – ВЕЛКЕЙД® Международное непатентованное название – бортезомиб (bortezomib) Лекарственная форма – лиофилизат для приготовления раствора для...»

«ОБЩАЯ СЕКСОПАТОЛОГИЯ Руководство для врачей Под редакцией Г. С. Васильченко МОСКВА "МВДЩВДНА" '1977 УДК 616.69+618.17 АВТОРЫ КНИГИ: И. Л. БОТНЕВА — -с. 75— 87, 168— 175, 873—891, 396; Г. С. ВА­ СИЛЬЧЕНКО, И. Л. БОТНЕВА, А. НОХУРОВ — с. 252—256; Г. С. ВАСИЛЬЧЕНКО, Ю. А. РЕШЕТНЯК — с. 317—328, 417— 425; А. НОХУРОВ — с. 426—437; С....»

«Feasibility of Eliminating the Use of Highly Enriched Uranium in the Production of Medical Radioisotopes Frank N. von Hippel and Laura H. Kahn Science and Global Security, 2006, Volume 14, pp. 151-162 ВОЗМОЖНОСТЬ ПРЕКРАЩЕНИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ВЫСОКООБОГАЩЕННОГО УРАНА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА МЕДИЦИНСКИХ РАДИОИЗОТОПОВ Фрэнк фон Хиппель и Лаура Кан Зн...»

«Н.П. Бочков, В.П. Пузырев, С.А. Смирнихина КЛИНИЧЕСКАЯ ГЕНЕТИКА Под редакцией академика РАМН Н.П. Бочкова УЧЕБНИК ЧЕТВЕРТОЕ ИЗДАНИЕ, ДОПОЛНЕННОЕ И ПЕРЕРАБОТАННОЕ Министерство о...»

«№ 2 2014 г. 14.00.00 медицинские и фармацевтические науки УДК 616.831-005.4-036.11:615.825 ВОССТАНОВЛЕНИЕ ДВИГАТЕЛЬНЫХ ФУНКЦИЙ У БОЛЬНЫХ С ИШЕМИЧЕСКИМ ИНСУЛЬТОМ В ОСТРОМ ПЕРИОДЕ О. В. Шинкоренко ГБОУ ВПО "Алтайский государственный медицинский университет" Минздр...»

«МИНИСТЕРСТВО ТРАНСПОРТА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ПРИКАЗ от 22 апреля 2002 года N 50 Об утверждении Федеральных авиационных правил Медицинское освидетельствование летного, диспетчерского состава, бортпроводников, курсантов и кандидатов, поступающих в учебные заведения гражданской авиации (с изменениями на 26 апреля 2011 года) _Документ с...»

«Bulletin of Medical Internet Conferences (ISSN 2224-6150) 1378 2015. Volume 5. Issue 11 ID: 2015-11-23-A-5454 Краткое сообщение Денисов Е.Н., Колосова Н.И., Мещеряков А.О., Рябченко А.Ю. Новый объективный метод классификации больных инсультом по степени тяжести заболевания методом дискриминантного анализа ГБОУ ВПО Оренбургский...»

«ЛИХАЧЁВ Эдуард Владимирович ВАРИАТИВНОСТЬ ПРОСОДИЧЕСКИХ СРЕДСТВ АКТУАЛИЗАЦИИ ФУТБОЛЬНОГО КОММЕНТАРИЯ (НА МАТЕРИАЛЕ НЕМЕЦКОГО ЯЗЫКА) Специальность 10.02.04 – германские языки Диссертация на соискание ученой степени кандидата филологических наук Научный руководитель: доктор филологических наук, профессор А. Д. Петренко Симферополь – 2017...»








 
2017 www.doc.knigi-x.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные документы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.