WWW.DOC.KNIGI-X.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Различные документы
 

«57 БИОТЕРАПИЯ ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. УДК 616-006-085.371.009.036 H.П. Ермакова, И.Н. Михайлова, И.Б. Меркулова, О.И. Коняева, Н.Ю. ...»

57

БИОТЕРАПИЯ ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ…

УДК 616-006-085.371.009.036

H.П. Ермакова, И.Н. Михайлова, И.Б. Меркулова, О.И. Коняева, Н.Ю. Кульбачевская, Т.В. Абрамова,

К.А. Барышников, Л.М. Михайлова

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ТОКСИЧНОСТИ

ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ВАКЦИНЫ «МЕЛАВАК»

РОНЦ им. Н.Н. Блохина, Москва

Контактная информация Ермакова Надежда Павловна, канд. мед. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории фармакологии и токсикологии НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей, Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва адрес: 115478, Москва, Каширское шоссе, 24; тел.: +7(499)612-78-83 e-mail: ne518@yandex.ru Статья поступила: 22.07.2010, принята к печати 02.03.2010.

Резюме Проведено доклиническое токсикологическое изучение противоопухолевой вакцины «Мелавак» с целью оценки ее безопасности и прогноза побочных и токсических эффектов при клиническом изучении у больных меланомой. Изучены локальная и системная токсичность, аллергенные свойства и туморогенность вакцины.

Противоопухолевая вакцина «Мелавак» нетоксична и рекомендована для клинической апробации.

Ключевые слова: вакцина, ген ГМ-КСФ, безопасность, аллергенность, туморогенность.

N.P. Ermakova, I.N. Mikhaylova, I.B. Merkulova, O.I. Konyaeva, N.Yu. Kulbachevskaya, T.V. Abramova, K.A. Baryshnikov, L.M. Mikhaylova



PRE-CLINICAL STUDY

OF ANTICANCER VACCINE «MELOVAC» TOXICITY

N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center of RAMS, Moscow Abstract The aim of this study was to examine the safety and prognosis of side and toxic effects of anticancer vaccine «Melovac». We have studied the local and systemic toxicity, its ability to be allergic and tumorogenic. Based on our pre-clinical study which reveal that «Melovac» vaccine is not toxic, we recommend it for clinical trials.

Key words: vaccine, GM-CSF gene, safety, allergenicity, tumorogenity.

Введение Целью нашей работы явилось доклиническое изучение токсичности противоопухолевой вакцины В последние годы широко изучается активная «Мелавак» для оценки ее безвредности, прогноза специфическая иммунотерапия злокачественных ново- побочных эффектов и потенциальных «рисков» при образований цельноклеточными вакцинами, которые применении человеку.

представляют собой живые аллогенные или аутолоМатериалы и методы гичные опухолевые клетки. В 1997 г. M. Drew Pardoll с соавт. запатентовали метод лечения и профилактики рецидивов меланомы, основанный на вакцинации ал- Вакцина «Мелавак» представляет собой клелогенными клетками, несущими общие меланомные точную линию меланомы человека Мel Kor [2] стаантигены трансфицированные геном человеческого бильно трансфецированную человеческим геном гранулоцитарно-макрофагального колониестимулиру- ГМ-КСФ, имеет генетическую конструкцию: вектор pBK – CMV (Clon Tech, США) со встроенной к ДНК ющего фактора (ГМ-КСФ). В последующем были созданы аналогичные вакцины на основе аллогенных и ГМ-КСФ человека. Вид трансфекции – стабильная, аутологичных ГМ-КСФ-трансфицированных клеточ- интегрированная. Метод трансфекции – липофекция, ных линий меланомы, а также немелкоклеточного рака при помощи набора Unifectin 56. Уровень трансфеклегкого [5–7] и рака простаты [9]. Эти вакцины под ции – 100 %. Количество секретируемого ГМ-КСФ общим названием GVAX проходят клинические испы- клетками – 78,1–84,0 нг/1 млн клеток /24 ч. Перед тания по I–II фазе. На I фазе клинических испытаний R. введением животным инактивирована на установке Soiffer и соавт. было показано, что вакцинация облу- АГАТ-Р -облучением в дозе 100 Гр.





ченными аутологичными клетками меланомы, секре- Исследование безвредности вакцины «Мелатирующими человеческий ГМ-КСФ, вызывает мощ- вак» проводили на стандартных сертифицированный противоопухолевый иммунитет у пациентов с ных животных в соответствии с российскими и медиссеминирующей меланомой. Вакцину вводили внут- ждународными требованиями по использованию рикожно и подкожно, начальная «стартовая» доза со- животных моделей в доклинических исследованиях ставляла 10 млн. клеток на человека [10]. для клеточной и генной терапии [3; 4]. Животные:

В Институте биологии гена РАН совместно с 80 мышей-самцов (CBAС57В1/6j)F1, массой 20–22 г;

РОНЦ была создана аналогичная GVAX цельнокле- 60 неинбредных крыс-самцов массой 170–250 г; 40 точная вакцина под названием «Мелавак», которая морских свинок-самок альбиносов массой 230–250 г и явилась объектом данного исследования. 42 кролика породы «Шиншилла» массой 1,7–2,2 кг.

№ 1/том 9/2010 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

58 БИОТЕРАПИЯ ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ…

Мыши были получены из питомника лабора- ко-лабораторные и функциональные показатели торных животных «Столбовая» РАМН; крысы – из здоровья (клинический и биохимический анализ разведения РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН; кроли- крови, анализ мочи, ЭКГ), данные аутопсии с макки – из ФГУП «Опытно-производственное хозяйст- роскопической и гистологической оценкой. Прово «Манихино»; морские свинки – из питомника должительность наблюдения составляла 120 суток.

ГУНЦ Биомедицинских технологий РАМН, Фили- Для исследования туморогенности вакцины ал «Андреевка». 22 гибридных иммунодефицитных «Мелавак» использовано 22 гибридные иммунодемышей-самок линии Balb/c nude массой 18–20 г фицитные мыши-самки линии Balb/c nude. Мышам, получены и содержались в специализированном служивших позитивным контролем, вводили некондиционированном отсеке РОНЦ при дозирован- инактивированные опухолевые клетки линии Mel Kor в дозе1107 клеток п/к в область боковой поном световом режиме, на стерильных бумажной подстилке, корме «МЭСТ» (Москва) и воде. верхности тела в объеме 0,2 мл. Мышам второй Вакцину «Мелавак» применяли при в/к и п/к группы вводили вакцину «Мелавак» аналогичным путях введения. В качестве контроля во всех иссле- способом в том же объеме и том же количестве дованиях использовали в/к и п/к введение изотони- клеток, что и контрольным мышам. Места инокуческого раствора хлористого натрия в адекватном ляции клеток осматривали и при наличии опухолеобъеме. Дозы вакцины «Мелавак», изученные в видных образований измеряли их и вычисляли объэкспериментах по локальной и системной токсич- ем последних. Мыши контрольной группы с разности, лимитировались максимальным общим объ- вившимися опухолями были умерщвлены на 14-е емом вводимой в/к вакцины (не более 0,5 мл на сутки опыта, мыши, получившие вакцину «Меламышь или крысу) и ее концентрацией (1108 вак» – на 21–63 сутки по мере ухудшения состоякл/мл). По окончании исследования мыши, крысы и ния здоровья. На аутопсии проводили осмотр мест кролики были умерщвлены методом усыпления инокуляции и внутренних органов, делая бритвой эфиром с последующим проведением аутопсии и послойные разрезы для визуального контроля метапатоморфологического исследования. статических поражений. Для гистологического исИзучение локальной токсичности проводили следования брали участки головного мозга, сердца, на кроликах и крысах. Вакцину вводили однократно легких, печени, почек, лимфатических узлов, селев/к или п/к в области спины в дозе 5105 кл/кг кро- зенки, костного мозга, а также участки кожи и опулика в концентрациях 1107 или 1108 кл/мл. На 3; холевидные образования с места введения вакцины 5; 14 и 30 сутки опытных и контрольных кроликов или клеток линии Mel Kor.

умерщвляли. Крысам вакцину вводили в/к ежеднев- Аллергизирующее действие вакцины «Мелано на протяжении 7 дней в СД 1,03107 или 10,3107 вак» оценивали по способности вызывать анафикл/мл. В качестве контролей использовали живот- лактический шок у предварительно сенсибилизироных интактных и животных, которым аналогично ванных животных [3]. Для сенсибилизации морвводили физиологический раствор. Для патоморфо- ским свинкам вакцину применяли через день в/м логического исследования крыс из опытных и кон- однократно и п/к двукратно в суммарных дозах, трольных групп умерщвляли на 1-е и 75-е сутки. равных терапевтической для морской свинки или в Исследование «острой» токсичности проводи- 10 раз ее превышающей. Аналогично вводили изоли на мышах и крысах при однократном в/к введении. тонический раствор хлористого натрия и сыворотку Критериями оценки «острой» токсичности были: из- крупнорогатого скота (СКРС). Вакцину «Мелавак»

применяли в концентрациях 1106 или 1107 клеток менение массы и температуры тела, количество лейкоцитов, клиническая картина интоксикации, пове- в 1 мл физиологического раствора. Для сенсибилиденческие реакции, аутопсия умерщвленных в конце зации препарат вводили двум группам животных в разовых дозах 0,3106 или 3,0106 кл/кг через день опыта животных. Мышам «Мелавак» вводили в/к в подушечки стоп в дозах, превышающих предпола- (первое введение – п/к, два других – в/м), для разгаемую дозу для человека в 1000 раз – 206,0107 решения – в суммарных дозах 0,91106 и 9,1106 кл/кг; в 100 раз – 20,6107 кл/кг; в 10 раз – 2,06107 кл/кг соответственно. Разрешение проводили внуткл/кг и адекватную предполагаемой дозе для человека рисердечно на 15-й день после окончания сенсибикл/кг. Концентрация вводимой животным лизации. После введения разрешающей дозы вакклеточной суспензии была от 1107 до 5107 кл/мл; цины и контрольных препаратов за животными объем от 0,05 до 0,5 мл (на 1–10 инъекций). Длитель- наблюдали в течение 48 ч. Оценку интенсивности реакции осуществляли по Weigle [11]. Статистиченость наблюдения за животными составляла 30 дней.

Тест «выздоровление» или тест развития «токсиче- скую обработку полученных результатов проводиских эффектов» проводили в отдельных исследовани- ли с помощью компьютерной программы «Статях на мышах со сроком наблюдения 140 дней. Кры- граф». Достоверность различий оценивали по tсам вакцину вводили в/к в область спины около хво- критерию Стьюдента.

ста в дозах, превышающих предполагаемую дозу для человека в 100 раз – 10,3107 кл/кг; в 10 раз – 1,03107 Результаты и обсуждение кл/кг и адекватную предполагаемой дозе для человека

– 0,103 107 кл/кг. Изучение локальной токсичности Исследование «хронической» токсичности При введении вакцины «Мелавак» в концентрации 1107 кл/мл кроликам местно-раздражаюбыли проведены на неинбредных крысах. Вакцину «Мелавак» вводили в/к ежедневно в течение 7 щего действия не выявлено. Однако при введении вакцины в концентрации 1108 кл/мл у кроликов дней. Крысы получали вакцину в суммарных дозах, превышающих предполагаемую дозу для человека отмечена местно воспалительная реакция, проявв 100 раз – 10,3107 кл/кг и в 10 раз – 1,03107 ляющаяся в отеке и гиперемии и обратимая на 7-й кл/кг и дозу адекватную предполагаемой дозе для день. При в/к многократном введении вакцины «Мечеловека – 0,103107 кл/кг. Критериями оценки лавак» крысам наблюдали умеренную местную восхронической» токсичности на крысах были: кли- палительную реакцию на 1-е сутки. На 75-е сутки ническая картина интоксикации животных, изме- макроскопических и микроскопических изменений в нения поведенческих реакций, массы тела, клини- коже и в подкожной клетчатке отмечено не было.

–  –  –

206,0107 10,7±2,0 35,6±7,7** 32,5±6,8** 17,0±4,8 20,9±3,1 15,7±3,3 20,6107 10,7±2,0 16,1±3,7 29,6±6,5* 20,5±3,8 24,9±3,1 10,7±3,3 2,06107 11,7±0,8 15,0±1,8 25,7±2,7* 17,2±5,7 25,5±3,0 10,4±3,7 0,206107 10,8±2,3 21,3±2,6* 23,3±4,5 24,4±2,6 23,4±3,3 9,7±2,9

–  –  –

10,3107 14,7±2,0 12,5±1,6 21,0±2,0* 12,1±1,4 17,9±2,9 14,5±1,9 14,1±1,1 1,03107 14,7±1,7 14,9±3,1 15,4±1,5 15,7±3,1 18,5±3,9 10,6±2,3 10,9±1,9 0,103107 13,8±2,1 10,1±1,4 12,6±1,4 12,7±2,3 13,4±1,3 11,6±2,4 11,7±2,1

–  –  –

Проведенные исследования по «хронической» Вакцина «Мелавак» в отличие от опухолевой токсичности в дозах, превышающих предполагаемую клеточной линии Mel Kor не обладает туморогендозу для человека в 100–10 раз, выявили, что вакцина ным действием. Вакцина «Мелавак» обладает слаМелавак» дозозависимо влияет на функции печени, быми аллергенными свойствами.

увеличивает активность ЛДГ, АЛТ и АСТ, а также Таким образом, проведенные токсикологиповышает содержание глюкозы в сыворотке крови ческие исследования показали, что вакцина «Мелаживотных. Вакцина «Мелавак» не влияет на общее вак» безопасна при однократном и многократном состояние и поведение животных, не изменяет мор- внутрикожном применении лабораторным животфофункционального состояния почек, сердца, желу- ным разных видов и может быть рекомендована в дочно-кишечного канала и не оказывает влияния на качестве терапевтической противоопухолевой вакпоказатели периферической крови. цины для клинической апробации.

Работа выполнена при финансовой поддержке Правительства Москвы в рамках Научно-технической Программы «Разработка и внедрение в медицинскую практику новых методов и средств диагностики и лечения онкологических и других заболеваний».

Литература

1. Граноцит. – Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. – М.: АстраФармСервис, 2009.

– С. Б-506–Б-507.

2. Михайлова И. Н., Лукашина М.И., Барышников А.Ю. и др. Клеточные линии меланомы – основа для создания противоопухолевых вакцин // Вестник РАМН. – 2005. – № 7. – С. 37–40.

3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ под ред. Р.У. Хабриева. 2 изд. перераб. и доп. – М.: Медицина, 2005. – С.13–23; 41–69; 170– 204.

4. FDA Guidance for Human Somatic Cell Therapy and Gene Therapy. – 1998.– ( FDA [21CFR ch ( 4 – 1 – 02 Edition) Part 58 ] ).

5. Greten T.F., Jaffee E.M. Cancer vaccines // J. Clin. Oncol. –1999. – Vol.17(3). – Р. 1047–60.

6. Nemunaitis J., Nemunaitis J. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor gene-transfected autologous tumor cell vaccine: focus[correction to focous] on non-small-cell lung cancer // Clin Lung Cancer. – 2003. – Vol. 5(3). – Р. 148–57.

7. Nemunaitis J. GVAX (GMCSF gene modified tumor vaccine) in advanced stage non small cell lung cancer // J. Control Release. – 2003. – Vol. 91(1–2). – P. 225–31.

8. Parmiani G., Rodolfo M., Melani C. Immunological gene therapy with ex vivo gene-modified tumor cells: a critique and a reappraisal // Human Gene Therapy. – 2000. – Vol. 11. – Р. 1269–75.

9. Simons J.W., Sacks N. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced allogeneic cancer cellular immunotherapy: the GVAX vaccine for prostate cancer // Urol. Oncol. – 2006. – Vol. 24(5). – P. 419– 24.

10. Soiffer R., Lynch T., Mihm M. et al. Vaccination with irradiated autologus melanoma cells engineered to secrete human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor generates potent antitumor immunity in patients with metastatic melanoma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. – Immunology. – 1998. – Vol. 95. – Р.

13141–6.

11. Weigle W.O., Cochrane G., Dixon F.L. Anaphylactogenic Properties of Soluble Antigen-Antibody Complexes in the Guinea Pig and Rabbit // J. Immunol. – 1960. – Vol. 95. – P. 5.

–  –  –

Б А В Г Е Д

Рис. 2. Участки кожи мышей Balb/c nude после введения вакцины «Мелавак». Микрофото иллюстрируют отсутствие опухолей:

А – мононуклеарная (макрофагальная) инфильтрация в сосочковом слое дермы;

Б – повышенная макрофагальная реакция в фиброзном тяже (в фасции);

В – соединительно-тканная клеточная реакция сосочкового слоя дермы и вокруг сосудов в подкожной клетчатке;

Г – участок утолщения кожи;

Д, Е – очажок детрита и макрофагов замурован в фиброзном тяже (в фасции);

Окраска гематоксилином и эозином. А, Б, В, Г, Д — (100); Е — (400).

Похожие работы:

«ГУД БАЙ, БЕРЛИН! TSCHICK Драма, Комедия, Семейный, Германия, 2016, 93 мин., 16+ Режиссёр: Фатих Акин В ролях: Ананд Батбилег, Тристан Гёбель, Николе Мерседес Мюллер, Аня Шнайдер, Уве Бом и др. Сайт фильма: www.tschick-film.de Трейлер:...»

«ЧЕЛЮСТНО ЛИЦЕВАЯ ХИРУРГИЯ И ХИРУРГИЧЕСКАЯ СТОМАТОЛОГИЯ УДК 616.216.1-002-036.12-018 МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ВЕРХНЕЧЕЛЮСТНОЙ ПАЗУХИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМАХ ХРОНИЧЕСКОГО ОДОНТОГЕННОГО ГАЙМОРИТА. Часть I А.Г. Гулюк1, С.Д. Варжапетян 2, Е.А. Григорье...»

«ВОРОБЬЕВА МАРИНА НИКОЛАЕВНА КЛИНИКО-НЕЙРОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ДИСКОГЕННЫХ РАДИКУЛОПАТИЙ В СТРУКТУРЕ ДОРСОПАТИЙ ПОЯСНИЧНО-КРЕСТЦОВОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ 14.01.11.нервные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медиц...»

«МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ "УРАЛЬСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИН...»

«Министерство образования и науки РФ Форма Ульяновский государственный университет Ф – Аннотация рабочей программы дисциплины АННОТАЦИЯ РАБОЧЕЙ ПРОГРАММЫ "Медицинская реабилитация" (по направлению/специальности ) 31.05.01. Лечебное дело Цели и задачи освоения дисциплины 1.Цели освоения дисциплины: "Медицинская реабилитация": сф...»

«Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" ЦЕНТРАЛЬНО-ЧЕРНОЗЕМНЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РА...»

«Ю. с. САПОЖНИКОВ, А. М. ГАМБУРГ СУДЕБНАЯ МЕДИЦИНА Допущено Главным управлением учебных заведений Министерства здравоохранения СССР в качестве учебника для студентов медицинских институтов ИЗДАТЕЛЬСКОЕ ОБЪЕДИНЕНИЕ "ВИЩА ШКОЛА" ГОЛОВНОЕ ИЗДАТЕЛЬСТВО КИЕВ — 1976 61:34 Cl 9 УДК 340.6(075.8) Судебная медицина. Ю. С. С а...»








 
2017 www.doc.knigi-x.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные документы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.