Главная >> Медицина - различные документы. Cпециальность 14.00.00

Pages: | 1 | 2 |

«НАУЧНАЯ ДИСКУССИЯ: ВОПРОСЫ МЕДИЦИНЫ Сборник статей по материалам XLVIII международной научно-практической конференции № 4 (35) Апрель 2016 г. Издается с мая 2012 года Москва УДК 61 ББК 5 Н 34 ...»

-- [ Страница 3 ] --

СЕКЦИЯ 17.

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ,

ФАРМАКОГНОЗИЯ

ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ГАБЕРЛЕЙ РОДОПСКОЙ

НА ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ МОНОНУКЛЕАРНЫХ

КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ

ВОЗДЕЙСТВИЯ

– – –

Аннотация. Проведено изучение влияния тотального экстракта из листьев Габерлeй Родопской на жизнеспособность мононуклеарных клеток периферической крови человека in vitro в зависимости от продолжительности его воздействия. Установлено, что экстракт Габерлеи вызавает время- и дозозависимый ответ клеток в культуре.

Ключевые слова: Габерлея Родопская, жизнеспособность клеток, окраска трипановым синим.

Введение.

С древних времен, человечество использует растения не только для еды, но и для лечения и профилактики заболеваний. Растения являются богатым и неисчерпаемым источником ценных натуральных продуктов для здоровья человека. Применение растительных соединений с фармацевтическом целью вырастает постоянно. Более 150000 видов растений были изучены и в составе некоторых обнаружены терапевтические субстанции. По данным Всемирной организации здравоохранения, лекарственные растения является лучший источником различными лекарственных веществ. Использование растительных экстрактов и фитохимикалиев может иметь важные значение при лечении заболеваний. Но лекарственные растения также могут синтезировать токсичные вещества (для защиты от инфекций, от насекомых и от травоядных), но которые часто влияют и на организмы, которые питаются на этих растениях. Поэтому тщательной анализ цитотоксичного потенциала лекарственные растении необходим для их относительно безопасное применение [7, с. 34].

Габерлея родопская (Haberlea rhodopensis Friv., HR), многолетние растение из рода Gesneriaceae, субсемейства Didymocarpeae. Этот вид реликт доледниковой эпохи, а также и балканский эндемичный вид [1, с. 150]. Распространённый в Болгарии прежде всего в лесах Родопы, в некаторых областях Средной горы и Старoй планины. HR в последние годы усиленно изучается. Из экстрактов HR обнаружены гликозиды муконозид (Muconosid) и паусцифлосид (paucifloside), хиспидулин С-гликозиды, аминокарбоновые кислоты, жирные кислоты, феноловые кислоты, фитостеролы, глицериды и др. [4, с. 21; 6, с. 38; 5, с. 215].

Цель данного исследования – изучить влияние растительного экстракта из листьев Габерлeй Родопской на жизнеспособность мононуклеарных клеток периферической крови человека in vitro в зависимости от продолжительности его воздействия.

Материалы и методы исследования.

Экстракт и реактивы. Тотальный экстракт листей Габерлеи был любезно предоставлен доцентом Б. Попов. Предварительно высушенные и измельченные листья были мацерираны 70 % этиловым спиртом в течение 48 часов с последующей дистилляцией спирта в вакуумном испарителе до соотношении дрогы/жидкой фазы 1:1. Количество экстрагированных веществ составляли 100 мг/мл [3, с. 74–75].

Histopaque®-1077, питательная среда RPMI-1640, термоинактивированная фетальная телячья сыворотка (ФТС), смеси антибиотиков и антимикотиков и краситель Трипановый синий были приобретены у компании Sigma Aldrich.

Выделение и культивирование клеток. Мононуклеарные клетки (моноциты и лифоциты) выделили из крови 6 здоровых людей обоего пола в возрасте от 22 до 35 лет. Мононуклеарные клетки выделяли методом центрифугирование в градиенте плотности препарата Histopaque®-1077. Затем МНК культивировали в культуральных флаконах в среде RPMI-1640 с добавлением L-глутамина, 10 %-й эмбриональной телячьей сыворотки, 1 % по объему смеси антибиотиков и антимикотиков и растительного экстракта Габерлеи.

Для изучения действия использовали 5 концентраций экстракта – 65 мкл/мл, 26 мг/мл, 13 мг/мл, 1,3 мг/мл, 0,13 мг/мл, и контролой без экстракта. Клетки инкубировали при 37 С в атмосфере с 5 % СО2 в течение 12 ч, 36 ч и 60 ч. Затем подсчитывали количество жизнеспособных клеток в контрольных (без внесения препарата) и в опытных пробах, используя тест исключения красителя с применением трипанового синего.

Тест на выживаемость при окраске трипановым синим. Тест проводили по методикам, описанным в книге «Лимфоциты.

Методы» [2, с. 50]. В лунку панели для микротитрования вносили по 10 мкл клеточной суспензии и 10 мкл 0,4 % раствора трипаного синего. Ресуспендировали клетки пипетированием и вводили каплю клеточной взвеси в гемоцитометрическую камеру. Затем подсчитывали не менее 100 клеток, отмечая голубые (погибшие) и неокрашенные (живые). Жизнеспособность (%) клеток рассчитывали по формуле: (количество живых клеток /общее количество клеток) х100.

Статистический анализ. Результаты были представлены в виде среднего значения.Для оценки статистической достоверности различий между соответственными средними значениями использовали непараметрическый дисперсионный анализ Крускала-Уоллиса.

За достоверные принимали различия средних величин при р0,05.

Обработка данных проводилась с использованием пакета программ STATISTICA 6.0 (StatSofInk., США).

Результаты и их обсуждение Результаты изучения влияния экстракта представлены на рисунке 1:

Рисунок 1. Влияние экстракта Габерлеи Родопской при разной продолжительности воздействия Результаты показывает, что экстракт Габерлеи вызавает время – и дозозависимый ответ клеток в культуре.

Во всех трёх случаях разной длительности экспозиции (12 ч 30 и 60 ч) с увеличением концентрации экстракта понижается жизнеспособности (р0,05). В интервале от 0,13 до 1,3 мкл/мл концентрации этот эффект более сильно выражен при более продолжительным воздействием. Различия между средними значениями изучаемых величин разной длительности инкубации при концентрацей 0 мкл/мл, 0,13 мкл/мл и 1,3 мкл/кл являются достоверными (p0,05). При концентрации 13 мкл/мл, 26мкл/мл и 65 мкл/мл определённая жизнеспособность ниже 40 %.

Её вычисленные стойности при разных длительности воздействия очень близкие и не имеют статистически достоверной разницы (р 0,05).

Заключение.

Полученные результаты исследования углубляют и расширяют представление о влияния экстракта Габерлеи Родопской.

Они дополняют аналитическую базу для специалистов, изучающих биологически активные вещества растительного происхождения в отношении их влияния на жизнеспособности клеток в условиях in vitro.

Список литературы:

Георгиева С.Й. Лучезащитный и антигенотоксичный потенциал 1.

растительных экстрактов и природных продуктов. – Изд-во КОТА, 2013 – С. 150–166.

Клаус Дж. Лимфоциты. Методы. – М.: Мир, 1990. – С. 50.

Попов Б.Н. Антимутагенный потенциал тоталного экстракта Haberlea 3.

Rhodopensis: Дис... канд. биол..наук. – Ст. З. – 2011. – С. 74–75.

Радев Р. Фармакологические эффекты фенилэтаноидных гликозидов // 4.

JCM – 2010. Vol. 2. № 1 – С. 20–23.

5. Berkov S., Nikolova M., Hristozova N. Momekov G., Ionkova I., Djilianov.

DGC–MS profiling of bioactive extracts from Haberlea rhodopensis: an endemic resurrection plant// J. Serb. Chem. Soc. – 2011. Vol. 76 № 2. – P. 211–220.

Ebrahimi С.Н., Gafner F., Dell'Acqua G.,. Schweikert K., Hamburger M..

(2011). Flavone 8-C-Glycosides from Haberlea rhodopensisFriv.

(Gesneriaceae)// Helvetica Chimica Acta – 2011. Vol. 94. № 1. – P. 38–45.

7. Varalakshmi K.N., Sangeetha C.G., Samee U.S., Irum G. Lakshmi H., Prachi S.P. In Vitro Safety Assessment of the Effect of Five. Medicinal Plants on Human Peripheral Lymphocytes // Tropical Journal of Pharmaceutical Research-2011. Vol 10. № 1. – Р. 33–40.