WWW.DOC.KNIGI-X.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Различные документы
 

Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 |

«Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского Национальный исследовательский университет Всероссийская общественная организация ...»

-- [ Страница 6 ] --

У первокурсников на ФМФ больше встречается ваготоников (35,29%), по сравнению с ППФ (16,67%), а студентов-нормотоников больше на ППФ (66,66%), нежели на физмате (47,06%). Симпатотоников на обоих факультетах встречается одинаковое количество (ФМФ – 17,65%, ППФ – 16,67%). В дальнейшем, в процессе обучения, на психолого-педагогическом факультете происходит увеличение числа студентов с ваготоническим типом регуляции ритма сердца при снижении доли лиц с нормотоническим типом регуляции. На физико-математическом факультете уровень ваготоников остаётся без изменений, но к 5 курсу увеличивается число студентов с симпатическим вариантом исходного вегетативного тонуса, также за счёт снижения доли нормотоников. Мы полагаем, что выявленное смещение вегетативного баланса на ФМФ в сторону преобладания симпатических влияний на сердечный ритм является следствием адаптации к более сложной программе обучения, по сравнению с программой ППФ. Проследив индивидуальную реакцию на экзаменационный стресс среди первокурсников, мы выявили, что на обоих факультетах наблюдалось смещение вегетативного баланса в сторону преобладания симпатических реакций на сердечный ритм. Однако, большее смещение в сторону симпатизации (на 18,53%) было выявлено у студентов, обучающихся по более сложным программам (ФМФ). При этом, если увеличение числа симпатотоников на ППФ происходило за счёт снижения числа нормотоников (на 16,7%) при общем увеличении ваготоников (на 8,33%), то на ФМФ оно повышалось только за счёт снижения числа ваготоников до 13,33% (35,29% в обычный учебный день).



Анализируя изменения вегетативного статуса старшекурсников, мы выявили, что адаптация к экзаменационному стрессу, возникшая в процессе 5 лет обучения, была более выражена у студентов, обучающихся по сложным программам. Так, среди пятикурсников физмата число симпатотоников оставалось на уровне обычного учебного дня, тогда как у студентов ППФ количество таковых, так же, как и на 1-м курсе, увеличивалось (на 25%). Следует отметить, что данное увеличение симпатотоников у студентов ППФ было значительно больше, по сравнению с реакцией на экзаменационный стресс у первокурсников.

Таким образом, по результатам исследования наиболее адаптированными к обучению оказались студенты ФМФ, показывающие наиболее стабильные изменения показателей кардиоинтервалографии во время экзаменационной сессии.

ФИЗИОЛОГИЯ ЖИВОТНЫХ

РАДИОПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА ЯДА ПЧЕЛЫ В СОСТАВЕ КОМПЛЕКСНОГО ПРЕПАРАТА

ПРИ ПЕРОРАЛЬНОМ ВВЕДЕНИИ КРЫСАМ

–  –  –

Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Н.Новгород, manjatal@ya.ru Обострение радиоэкологической ситуации в мире ставит задачу поиска научно-обоснованных методов и средств, обеспечивающих адаптацию и повышение резистентности организма человека и животных к повреждающему действию радиации. Несомненный интерес в этом направлении исследований вызывают яды природного происхождения. Ранее было выявлено, что при инъекционном введении малых доз пчелиного яда (ПЯ) наблюдается длительный защитный эффект к действию ионизирующей радиации. Однако парентеральное применение яда изза его высокой антигенной и аллергенной активности ограничено в практической медицине, а введение ПЯ перорально не оказывает желаемого эффекта из-за белковой природы компонентов. Целью работы явилось изучение радиозащитных свойств комплексного препарата, содержащего наночастицы золота (Au), стабилизированные ПЯ с последующим экранированием их хитозаном (ХТЗ) при действии -облучения на организм животных.





Работа была проведена на белых нелинейных крысах-самцах m=200–220 Опытной группе вводили препарат ПЯ (0,5 мг/кг) - Au (0,5 мг/кг) - ХТЗ (100 мг/кг), контрольной группе - комплекс «Au-ХТЗ». Группа «-облучение»

введению препарата не подвергалась. За относительную норму принимались показатели интактных животных.

Препараты вводили в объеме 1 мл на животное per os с помощью зонда периодичностью 1 раз/сутки. По окончании введения препаратов животные контрольных и опытной групп подвергались однократному -облучению в дозе 5 Гр. Забор крови осуществляли на 1 и 28 сутки после облучения и определяли количество лейкоцитов (Le) и конечные продукты перекисного окисления – основания Шиффа (ОШ). Подсчет общего количества клеток красного костного мозга (ККМ) производили на 28 сутки.

На 1 сутки после облучения содержание количества Le в группе «ПЯ-Au-ХТЗ», было статистически значимо выше (р 0,05) показателей животных группы «-облучение» и приближалось к показателям интактных, в контрольных группах наблюдалось снижение количества Le в 4 раза по отношению к интактным животным, что свидетельствует о повреждающем действии радиации. В течение следующих 4х недель количество Le и ОШ в группе «ПЯ-Au-ХТЗ» практически не отличалось от значений у интактных животных, что указывало на окончание восстановительных процессов. У животных контрольных групп количество Le превышало в 2 раза, об этом же свидетельствует и повышенное содержание ОШ. Из полученных результатов следует, что изменения в системе крови у контрольных животных могут объясняться развитием стресс реакции на повреждающее действие радиации, сопровождающееся нарушением гемопоэза и регенеративных процессов в костном мозге животных. Не значительное снижение количества ККМ в группе «ПЯ-Au-ХТЗ» (р0,05) относительно животных групп «интактные» и «-облучение» свидетельствует о ингибировании пролиферативных процессов, что способствует увеличению времени процессов репарации (антимутагенный эффект пчелиного яда). Это можно объясняться тем, что перед облучением опытные группы находились в состоянии реакции устойчивой активации, которая характеризуется подъемом защитных систем организма и формированием резистентности к действию повреждающих факторов, в нашем случае ионизирующей радиация.

Полученные результаты на экспериментальных животных показывают, что с помощью нанотехнологий создан препарат пчелиного яда для перорального применения, проявляющий радиозащитные свойства.

РАДИОТЕЛЕМЕТРИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ АРОЕ-ПОДОБНОГО ПЕПТИДА COG1410

НА ПАРАМЕТРЫ ГЕМОДИНАМИКИ У МЫШЕЙ CD1

–  –  –

Филиал Учреждения Российской Академии наук Института биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова, Пущино, lenoktuk@rambler.ru Пептид COG1410 является фрагментом рецептор-связывающего домена аполипопротеина Е (АроЕ). В исследовании на мышиной модели черепно-мозговой травмы пептид COG1410 оказывал нейропротекторный эффект в дозе 0.6 мг/к Однако, известно, что большие количества АроЕ способствуют экспрессии индуцибельной NOсинтазы (iNOS). Этот факт позволяет предположить, что пептид COG1410, обладающий всеми свойствами апобелка, связанными с ApoE-рецепторным взаимодействием, будет стимулировать iNOS и синтез оксида азота (NO). Имеются данные о том, что индукция iNOS в гладкомышечных клетках может быть связана с миграцией АроЕ в стенки сосудов из сосудистого русла, то есть можно предположить наличие вазомоторных влияний АроЕ, а следовательно и его производных. Целью нашей работы стало изучить влияние пептида COG1410 в разных дозах на гемодинамические параметры мышей. Наиболее подходящим методом для долговременного и деФИЗИОЛОГИЯ ЖИВОТНЫХ тального изучения функций сердечно-сосудистой системы (ССС) является долговременная радиотелеметрическая регистрация параметров гемодинамики. Использовали самцов мышей линии CD-1 возрастом 8-10 недель и массой 40-50 Мышам были имплантированы датчики для измерения артериального давления. Животным однократно вводили пептид COG1410 в хвостовую вену в дозах 0,6 мг/кг, 1,8 мг/кг и 6 мг/к Параметры гемодинамики регистрировали в течение двух суток до и двух суток после инъекции с помощью радиотелеметрической системы сбора и анализа физиологических сигналов Data Science, Inc. COG1410, введенный в дозах 0,6 мг/кг и 1,8 мг/кг, не оказывал выраженного влияния на ССС. В дозе 6 мг/кг пептид вызывал выраженное снижение среднего артериального давления (САД) и частоты сердечных сокращений (ЧСС). Максимум снижения САД (-63 ± 3 %) наблюдался на 20-й минуте после введения. Понижение САД длилось 4 часа. ЧСС при этой дозе также понижалась, начиная со 2-ой минуты, и на протяжении 2-х часов оставалась пониженной. Максимум падения ЧСС приходился на 20-ю минуту (-47 ± 8%). Продолжительную гипотензию и брадикардию, отмеченные при введении мышам COG1410 в дозе 6 мг/кг, следует расценивать как одно из проявлений токсического действия пептида на ССС.

Следует отметить, что доза пептида, при которой проявились его гемодинамические эффекты, превосходит терапевтическую дозу в 10 раз. COG1410 в большой дозе, вероятно, взаимодействовал с ApoE-рецепторами сердца и сосудов, вовлекая их в острый ответ. Таким образом, результаты исследования позволяют прогнозировать влияние пептида COG1410 на сердечно-сосудистую систему при передозировке

ИЗМЕНЕНИЕ АКТИВНОСТИ АЛКОГОЛЬДЕГИДРОГЕНАЗЫ ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ДЕЙСТВИИ ЦЕФАЗОЛИНА В УСЛОВИЯХ IN VITRO

–  –  –

Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Н.Новгород, alulanova@yandex.ru Медикаментозные поражения печени являются одной из важнейших проблем современной экспериментальной и клинической биохимии печени. Метаболические процессы биотрансформации ксенобиотиков в печени осуществляются ферментами гепатоцитов. К числу ксенобиотиков относится большинство лекарственных средств (ЛС) различной химической природы. Одним из основных ферментов метаболизма этанола в печени является алкогольдегидрогеназа (АДГ), реакция которой в физиологических условиях смещена в сторону образования эндогенного спирта, а не формирования ацетальдегида, который является для организма более токсичным метаболитом. Известно, что АДГ, как фермент биотрансформации, принимает участие в реакциях детоксикации различных ЛС. В частности вопрос о влиянии антибиотиков на данный фермент и изменения его свойств в печени имеет приоритетное значение для процессов биотрансформации биологически активных метаболитов организма. Целью исследования явилось изучение влияния цефазолина на активность алкогольдегидрогеназы в цитоплазматической и микросомальной фракциях печени крыс в условиях in vitro. С помощью дифференциального центрифугирования из печени крыс получали цитоплазматическую и микросомальную фракции. Во фракциях определяли активность АДГ в прямой и обратной реакциях после предварительной преинкубации с препаратом в условиях in vitro. В результате проведенных исследований установлено, что активность АДГ в цитоплазматической и микросомальной фракциях в прямой и обратной реакциях существенно уменьшается по мере роста концентрации цефазолина. Особенно это выражено для микросомальной АДГ, когда активность фермента падает до 96%. Предполагается, что микросомальная алкогольдегидрогеназа является мембраносвязанным ферментом.

Поэтому свойства фермента тесным образом связаны с изменениями физико-химического состояния мембраны.

Возможно, что цефазолин взаимодействует с мембранами микросом, вызывая изменения их физико-химических свойств, что в свою очередь приводит к конформационным изменениям макромолекулы алкогольдегидрогеназы, связанной с мембраной, в результате происходит ингибирование активности фермента. Не исключатся, что цефазолин обладает непосредственным влиянием и на сам фермент, вернее взаимодействует с SH – группами активного центра алкогольдегидорогеназы, что также приводит к усилению ингибирующего эффекта данного препарата. На возможность такого механизма указывают полученные нами данные изменения активности АДГ в цитоплазматической фракции печени. Предполагается, что фармакологический препарат (цефазолин) оказывает ингибирующее влияние на активность алкогольдегидрогеназы печени, как минимум по двум механизмам. С одной стороны это влияние на мембрану микросом, с которой взаимодействует АДГ, а с другой взаимодействие цефазолина с SH-группами активного центра макромолекулы фермента.

СРАВНИТЕЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СЫВОРОТКИ КРОВИ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИХ ЛИПИДНЫЙ И БЕЛКОВЫЙ ОБМЕНЫ У ЖИТЕЛЕЙ БЛАГОПРИЯТНОГО РЕГИОНА

–  –  –

В настоящее время наблюдаются значительные изменения, происходящие в структуре и динамике здоровья населения, так как формирование здоровья человека все больше и больше зависит от природных, антропогенных, социально-экономических, производственных и бытовых факторов. Одним из результатов воздействия вредных факторов может быть экозависимые патологические изменения, происходящие, прежде всего, в виде донозологических состояний, а также ростом неспецифических патологий. Функционирование ряда органов и систем организма во время патологии может легко привести к срыву, декомпенсации той или иной системы или органа.

Объективное исследование клеточного и химического состава биологических жидкостей лабораторными средствами проводятся с целью получения информации о состоянии здоровья человека, виде патологии и о влиянии проводимых лекарственных мероприятий. Однако безукоризненное выполнение исследований, дающих максимально близкие к истине результаты, еще не становятся полезными для медицины, если они не включены в диагностический статистический процесс. Необходимо доказать, что обнаруженное значение результата исследования достоверно отличаются от значений свойственных здоровому человеку.

В связи с вышеуказанным задачей исследования явилось установление грани (нормы) между составами биоматериалов (сыворотки крови) у здорового и больного человека, как в общем виде, так и применительно к конкретным аналитам и формам патологий.

Целью явилось изучение биохимических показателей белкового и липидного спектра крови у групп практически здоровых и больных.

В работе провели сравнение групп показателей лабораторных исследований препарата крови с помощью проверки статистических гипотез с использованием двух методов: параметрического (t-критерий Стьюдента) и непараметрического (критериев Манна-Уитни, Вольфа - Вольфовица, Колмогорова-Смирнова).

Сравнительный анализ биохимических показателей крови выявил, что согласно параметрическому методу статистической обработки достоверно значимые отличия имеются в группах у мужчин и женщин. Проведя сравнения с помощью t-критерия Стьюдента, получили различия средних значений концентрации альбумина у мужчин и женщин, различающихся по возрастному признаку, являются статистически значимые. Использование непараметрических методов дополнило статистический анализ и выявило достоверно значимые половые различия в концентрации ЛПВП и концентрации Т А также статистически значимые различия в концентрации ОХ, ЛПНП и КА в возрастных группах как у мужчин, так и у женщин с вероятностью ошибки менее 0,1 % (р‹0,001), у женщин статистически значимые различия концентрации ТГ и вероятность ошибки составляет 1% (р‹0,01).

Интервал нормальных величин в клинической биохимии устанавливают для дифференцировки патологических и нормальных результатов, оценки эффективности лечебных мероприятий, определения факторов риска и прогноза заболеваний, выполнения профилактических и эпидемиологических исследований.

ОСОБЕННОСТИ ВНУТРИУЛЬЕВОГО ПОВЕДЕНИЯ ПЧЁЛ ПРИ ДЕЙСТВИИ

ЭКСТРЕМАЛЬНЫХ АБИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ СРЕДЫ

–  –  –

Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Н. Новгород, kfg@bio.unn.ru Известно, что при действии таких экстремальных факторов, как сильный ветер (свыше 16 м/с), дождь, гроза, лётная деятельность пчёл прекращается и пчёлы сосредотачиваются в пространстве между крайними сотовыми рамками. Однако внутриульевое поведение, в частности агрессивное поведение, пчёл в экстремальный период недостаточно изучено. В отличие от исследований прошлых лет, в которых агрессивность регистрировалась визуально, или по изменению звукового режима семьи, нами была разработана установка, при помощи которой производилась объективная регистрация количества пчел, находящихся на электродной сетке источника раздражения. Принципиальной особенностью данной установки является тот факт, что источник раздражения состоит из отдельных электродов, замыкание которых осуществляется пчелами. Таким образом, чем больше количество пчел на электродной сетке, тем больше нагрузка цепи. Регистрация тока цепи позволяет судить о количестве пчел, находящихся на электродной сетке в данный момент времени и опосредованно судить об агрессивном поведении пчёл. При раздражении в ночное время с 22.00 до 5.00 часов максимальная сила тока отмечалась через 30 секунд после включения электростимулятора. Однако уже через 30 минут нагрузка снижалась более чем в 3 раза. Затем следовало дальнейшее снижение силы тока и к 5.00 часам утра величина нагрузки не превышала исходных величин. После отключения стимулятора в течение первого получаса нагрузка оставалась на уровне контрольных величин. К 6.00 часам утра нагрузка увеличивалась на 0,1 мА, что говорит не об остаточных явлениях электростимуляции, а о повышении спонтанной двигательной активности пчел. Дневная электростимуляция сопровождалась меньшей агрессивностью пчел в отношении источника раздражения. При трехчасовой электроФИЗИОЛОГИЯ ЖИВОТНЫХ стимуляции величина тока в цепи была значительно ниже, чем при ночном раздражении. Так, если при ночном раздражении в первые минуты стимуляции величина тока равнялась 7,72±0,44 мА, то при дневном эта величина колебалась в пределах 2,5-3,5 мА. Этот эффект легко объясним с точки зрения топографии постановки источников раздражения в улье и биоритма летных пчел. Источники раздражения во всех опытах устанавливались между крайними медовыми рамками в месте сосредоточения летных пчел. Естественно, что в ночное время количество летных пчел в местах постановки источника раздражения значительно больше, чем в дневное время. Поэтому и величина тока в цепи раздражителя в 2-3 раза больше в ночное время. При рассмотрении внутриульевой агрессивности пчел при сильном ветре было показано, что величина тока в цепи раздражителя значительно выше, чем при стимуляции в то же время (14.00-17.00) в безветренную погоду. Так, при стимуляции в безветренную погоду ток цепи равнялся 3,37±0,47, а в ветреную - 7,58±0,33 мА. При раздражении пчел импульсным током с 18.00 до

21.00 часа во время сильного дождя с грозой внутриульевая агрессия пчел была выше, чем в предыдущей серии, и выше, чем при стимуляции в то же время в ясную погоду. Через 0,5 часа после включения источника раздражения ток цепи раздражения увеличивался с 1,6±0,01 мА в контроле до 10,23±0,21 мА в опыте. При раздражении пчел в ясную погоду в то же время суток ток увеличивался с 1,1±0,02 в контроле до 2,48±0,05 мА в опыте.

Скорость адаптации пчел при раздражении в особых метеоусловиях (ветер, дождь, гроза) была значительно ниже, чем в условиях ясной безветренной погоды. Таким образом, внутриульевая агрессивность пчел в ответ на действие раздражителя зависит от времени суток и степени их занятости в процессах, обеспечивающих оптимальное функционирование пчелиных семей.

ОГРАНИЧЕННЫЙ ПРОТЕОЛИЗ Ф-АКТИНА ПРОТЕАЛИЗИНОМ МОЖЕТ СПОСОБСТВОВАТЬ ИНВАЗИИ БАКТЕРИЙ

–  –  –

Ранее нами была показана способность к инвазии в эукариотические клетки бактерий Serratia, синтезирующих актин-специфические металлопротеазы. Мы показали, что при введении гена протеализина, металлопротеазы Serratia proteamaculans, неинвазивные бактерии E. coli приобретают способность проникать в клетки карциномы гортани человека Hep-2. Бактериальная инвазия может быть вызвана проникновением протеазы в эукариотические клетки, а также активацией других ферментов в самой бактерии или во внеклеточной среде. Известно, что бактерии, в которые введен ген протеализина с точечной мутацией в активном сайте, синтезируют неактивный фермент, не способный к автопроцессингу. Мы показали, что эти бактерии также способны к инвазии. Это позволяет нам предполагать, что мутантный протеализин активируется вне бактериальной клетки другими протеазами. Вне клетки бактериальные протеазы могут напрямую приводить к деградации внеклеточного матрикса.

Кроме того, некоторые бактерии секретируют протеазы, которые становятся вирулентными факторами, активируя или ингибируя матриксные металлопротеазы (ММП). Протеализин расщепляет предшественник ММП-2 с образованием белка с молекулярным весом 66 кДа, характерным для активной формы ММП-2, что указывает на возможность активации ММП-2 протеализином. Однако добавление протеализина в клеточную среду не приводит к проникновению неинвазивных бактерий E. coli внутрь эукариотических клеток. Таким образом, протеализин, по-видимому, способствует инвазии бактерий, оказавшись внутри эукариотической клетки. В процесс инвазии всегда вовлечены перестройки актинового цитоскелета, а актин специфически расщепляется протеализином.

Поэтому актин является наиболее вероятной мишенью для внутриклеточного действия протеализина. Протеализин расщепляет в актине пептидную связь Gly42–Val43, расположенную в ДНКазной петле, и связи Gly63–Ile64 и Thr66–Ile67 в нуклеотидной щели молекулы. Если весовое соотношение фермент/ глобулярный актин не превышает 1 : 50, 36 кДа фрагмент актина, образующийся в результате гидролиза связи Gly42–Val43, не подвергается дальнейшему протеолизу. Расщепленный протеализином актин теряет способность к полимеризации, которая частично восстанавливается после замены ионов Ca на ионы Mg. В эукариотической клетке актин на 80 % находится не в глобулярной, а в фибриллярной форме, менее доступной для протеолиза. Однако протеализин уже при весовом отношении к актину 1:50 расщепляет фибрилярный актин с образованием 36 кДа фрагмента, а при весовом отношении 1 : 5 образуется дополнительный 33 кДа фрагмент. В процессе расщепления уменьшаются степень полимеризации фибриллярного актина, определяемая по светорассеянию, и способность к осаждению при ультрацентрифугировании. Таким образом, протеализин расщепляет не только глобулярный, но и фибриллярный актин, что приводит к его деполимеризации и может обеспечить перестройки актинового цитоскелета в эукариотической клетке, необходимые для интернализации бактерий.

Работа поддержана грантом РФФИ 08-04-00408.

ФИЗИОЛОГИЯ ЖИВОТНЫХ

ИССЛЕДОВАНИЕ СУБКЛЕТОЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ И НЕКОТОРЫЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ

СВОЙСТВА НАД-ИЗОЦИТРАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ ИЗ ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ВВЕДЕНИИ ФАКТОРА

НЕКРОЗА ОПУХОЛИ- И ДЕЙСТВИИ ГЕПАТОПРОТЕКТОРОВ

–  –  –

В печени крыс фактор некроза опухоли- (ФНО-) выступает в качестве основного медиатора развития дисфункции и гибели гепатоцитов, сопровождающих токсические поражения печени. При этом происходит развитие оксидативного стресса. Подавлению интенсивности свободнорадикального окисления может способствовать изменение регуляции ферментов цикла трикарбоновых кислот (ЦТК). В этой связи вызывает интерес функционирование НАД-зависимой изоцитратдегидрогеназы (КФ 1.1.1.41; НАД-ИДГ), одного их ключевых ферментов ЦТК. Известно, что тиоктовая кислота (ТК) и мелатонин обладают антиоксидантными свойствами, обеспечивают мощную поддержку работы других звеньев антиоксидантной системы в организме и являются эффективными гепатопротекторами.

Изучение распределения активности НАД-ИДГ по субклеточным фракциям гепатоцитов методом дифференциального центрифугирования показало, что наибольшее количество фермента как в печени контрольных животных, так и крыс, которым вводили ФНО-, а также ТК и мелатонин на фоне развития патологического состояния, содержится в митохондриях (около 96-98%). При этом на долю цитоплазматической фракции приходится не более 4% от общей активности, что, по всей видимости, связано с перекрестным загрязнением субклеточных фракций. Активность НАД-ИДГ при индукции апоптоза возрастает в 1,3 раза по сравнению с контрольной группой. Под действием ТК и мелатонина на фоне развития апоптоза происходит снижение активности НАД-ИДГ в 1,3 и 1,2 раза, по сравнению с данными в условиях патологии. С помощью разработанной схемы выделения фермента, были получены в результате 72,3-; 71,2-; 68,4- и 68,3-кратной степени очистки ферментные препараты НАД-ИДГ из митохондриальной фракции гепатоцитов контрольных крыс и животных, которым вводили ФНОа также ТК и мелатонин на фоне развития апоптоза, с удельной активностью 3,6; 4,4; 3,7 и 3,7 Е/мг белка соответственно.

Выход фермента составил 17,6; 17,1; 22,4 и 20,0%. Гомогенность ферментных препаратов НАДИДГ из печени исследуемых групп животных была подтверждена электрофорезом в полиакриламидном геле с последующим проявлением на белок. Белок проявлялся в виде одной полосы с идентичными значениями электрофоретической подвижности фермента (Rf 0,18). Молекулярная масса НАД-ИДГ из печени контрольных животных, определенная методом гель-фильтрации через колонку с Toyopearl HW-65 составляет 157,5±4,20 кДа.

При введении крысам ФНО- и действии гепатопротекторов на фоне развития апоптоза молекулярная масса фермента достоверно не изменяется. Методом электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия было получено значение молекулярной массы субъединицы фермента, которое составляет 37,5 кДа, что позволяет сделать заключение о тетрамерной четвертичной структуре НАД-ИД Сходные значения величин субъединичной молекулярной массы наблюдались при электрофорезе ферментных препаратов, полученных из печени крыс при развитии апоптоза и действии ТК и мелатонина на фоне патологического состояния. Таким образом, в условиях нормы, при введении ФНО- и действии гепатопротекторов на фоне развития апоптоза не происходит изменения молекулярной массы НАД-ИДГ из печени исследуемых групп крыс, и, вероятно, изменение активности фермента не связано с ассоциативно-диссоциативным механизмом регуляции.

МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НОВОЙ СУБПОПУЛЯЦИИ КЛЕТОК ЦЕЛОМИЧЕСКОГО ЭПИТЕЛИЯ МОРСКОЙ ЗВЕЗДЫ ASTERIAS RUBENS L.

–  –  –

Изучение механизмов регенерации иглокожих приобретает огромное значение, поскольку животные класса Echinodermata обладают повышенными способностями к восстановлению утраченных органов и тканей. Важную роль во всех защитных реакциях иглокожих выполняют целомоциты (ЦЦ). Восстановление пула клеток целомической жидкости (ЦЖ) после травмирования происходит достаточно быстро, однако, источник, особенности дифференцировки этих клеток и участие целомоцитов в процессе регенерации до сих пор мало изучены. Одним из предполагаемых источников ЦЦ при значительной потере ЦЖ являются клетки целомического эпителия (ЦЭ).

Настоящая работа посвящена исследованию механизмов восполнения клеточной популяции целомоцитов (ЦЦ) Asteroidea при травмировании. Проведенный ранее морфологический выявил в популяции клеток ЦЭ присутствие клеток с высоким ядерно-цитоплазматическим отношением, характеризующихся структурированным ядром и способных включать бромдезоксиуридин, что указывает на пролиферативную активность этого типа клеток. В

ФИЗИОЛОГИЯ ЖИВОТНЫХ

процессе ферментативного выделения клеток ЦЭ была обнаружена субпопуляция клеток, слабо связанных с ЦЭ, которые могут быть выделены без дополнительной ферментативной обработки. Данная субпопуляция клеток не была исследована ранее, а ее способность диссоциировать от ЦЭ в определенных условиях указывает на ее особые функции, которые могут быть связаны с восполнением клеточной популяции ЦЦ. Целью настоящей работы является более подробный анализ новой субпопуляции клеток ЦЭ и сравнение этих клеток с суммарной популяцией клеток ЦЭ. Был проведен морфологический анализ после окрашивания суспензий азур-эозином, исследован клеточный состав после прикрепления к белкам внеклеточного матрикса (окраска родамин-фаллоидином и DAPI). Проведено исследование пролиферативной активности суммарной популяции клеток in vivo и в условиях in vitro при культивировании.

Морфологический анализ новой субпопуляции клеток ЦЭ показал, что доля клеток с высоким ядерноцитоплазматическим отношением составляет 66% в контрольной группе и 78% в популяции клеток, выделенных через 5 часов после травмирования животных. Окрашивание клеток ЦЭ ядерным красителем DAPI и родаминфаллоидином после посадки на ламинин (Лм) показал, что клетки этого типа избирательно прикрепляются к Лм и характеризуются структурированным ядром, а актиновый цитоскелет либо не выражен, либо представляет собой мелкие гранулы актина. Доля клеток этого типа, прикрепленных на Лм, составляет около 90%. Клетки данного типа как in vivo, так и в условиях культивирования способны включать бромодезоксиуридин, и окрашиваются антителами к Н3-фосфогистону, присутствие которого характерно для митотических клеток. Следовательно, эти клетки являются пролиферирующими. На протяжении 2 месяцев культивирования клетки данной субпопуляции были способны образовывать колониеподобные агрегаты, в которых также наблюдалась пролиферативная активность. Кроме того, клетки окрашивались антителами к транскрипционному фактору Oct-4, который является маркером стволовых клеток. Таким образом, выявлена новая субпопуляция клеток ЦЭ, обладающая пролиферативной активностью in vivo и сохраняющая способность к пролиферации при культивировании.

ВЛИЯНИЕ АНЕСТЕТИКОВ НА ВЫРАЖЕННОСТЬ ИНФАРКТ-ЛИМИТИРУЮЩЕГО ЭФФЕКТА

ИШЕМИЧЕСКОГО И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕКОНДИЦИОНИРОВАНИЯ У КРЫС СD

–  –  –

Кратковременные периоды ишемии и реперфузии способны защищать миокард от необратимых повреждений, вызванных последующим длительным ишемическим и реперфузионным стрессом. Это явление, обнаруженное в 1986 году С.Е. Murry с соавт. и названное ишемическим прекондиционированием (ИП), ограничивает размеры инфаркта, улучшает восстановление функции сердца после ишемии. В последующие годы было выяснено, что инициирование адаптационных механизмов ИП возможно с помощью правильно подобранных фармакологических подходов, имитирующих защитные эффекты прекондиционирования миокарда без использования ишемических стимулов. Так, морфин может мимикрировать защитный эффект ИП.

Тем не менее, существует ряд факторов, ограничивающих действие механизмов прекондиционирования. Выбор анестезирующего агента является важным моментом при экспериментальном моделировании острого инфаркта миокарда. На изолированных кардиомиоцитах было продемонстрировано, что анестезирующие средства проявляют различные эффекты в отношении защиты клеток. Таким образом, следует учитывать возможность неблагоприятного действия некоторых препаратов на переносимость ишемии. В связи с этим в настоящей работе изучалось влияние уретанового и кетамин-ксилазинового наркоза на размер инфаркта миокарда при ишемическом и фармакологическом прекондиционировании у крыс CD. Опыты проводились на крысах Sprague Dawley при искусственной вентиляции легких.

Всех животных подвергали 25-минутной окклюзии левой коронарной артерии с последующей 2-часовой реперфузией. За 30 минут до окклюзии крысы получали три 5-минутные коронароокклюзии, разделенные между собой 5-минутными эпизодами реперфузии (группа «ишемическое прекондиционирование»), или три 5-минутные инфузии морфина (20 мкг/кг/мин), разделенные 5-минутными периодами (группа «фармакологическое прекондиционирование»). Контролем служили животные, у которых моделировали окклюзию-реперфузию без дополнительных вмешательств. Зону инфаркта определяли окрашиванием 2,3,5-трифенилтетразолием хлоридом и подсчитывали в виде отношения к зоне риска. Так, ишемическое прекондиционирование приводило к значительному уменьшению зоны инфаркта как при применении уретана (14,1±4,1% относительно контроля 42,9±2,7%), так и при кетамин-ксилазиновом наркозе (14,6±3,2% в сравнении с контролем 43,8±2,8%). Однако, использование этих же анестетиков в группах «фармакологическое прекондиционирование» привело к статистически достоверному снижению размера инфаркта лишь у животных, анестезированных уретаном (33,3±2,7%, Р0,05 относительно контроля), тогда как в группе у животных наркотизированных кетамин-ксилазином размер инфаркта статистически значимо не отличался от такового в контроле (37,3±5,2%). Полученные данные позволяют предФИЗИОЛОГИЯ ЖИВОТНЫХ положить, что кетамин-ксилазиновый наркоз ограничивает действие морфина, отменяя действие фармакологического прекондиционирования, но не влияет на эффективность ишемического прекондиционирования. Уретан является более оптимальным средством для наркоза и оказывает максимальный инфаркт-лимитирующий эффект как при ишемическом, так и фармакологическом прекондиционировании морфином у крыс СD.

СОВРЕМЕННЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ПОДХОДЫ ИССЛНДОВАНИЯ ОБОНЯТЕЛЬНОЙ РЕЦЕПЦИИ ЧЕЛОВЕКА

–  –  –

Нижегородский государственный университет имени Н.И. Лобачевского, Н.Новгород, mashukl@mail.ru В последние годы обоняние человека привлекает большое внимание исследователей, что связанно с возможностью использования различных тестов, для оценивания обонятельной чувствительности, в ходе ранней диагностики различных нейродегенеративных заболеваний. Как показывает анализ доступной литературы, для оценки рабочих характеристик обонятельной системы используют различные субъективные и объективные методы. Для первичной оценки обонятельной функции широко используют психофизические исследования. Измерение порогов чувствительности осуществляют с помощью тестов, в которых используют батареи разведений веществ, которые предъявляют один за другим по возрастающей (или убывающей) в паре с образцом-пустышкой (растворителем). От испытуемого требуется назвать, какой из двух образцов имеет запах, вне зависимости от того, чувствует он его или нет. В тесте на различение запахов или его идентификацию испытуемому предлагают назвать вид предъявляемого запаха, при этом концентрация предъявляемого раздражителя заведомо значительно превышает пороговые значения. Среди тестов на идентификацию запаха также используются подходы с предложением испытуемому выбора вида запаха среди нескольких вариантов запахов, обозначенных в списке. Измерение чувствительности органов обоняния у человека при помощи специальных приборов – ольфактометров, применяют как дополнения к психофизиологическим исследованиям чувствительности с помощью простого предъявления запахов в контролируемых условиях его подачи. В настоящее время на стадии разработки находится электрофизиологический метод оценки работы обонятельной системы, а также использование метода магнитно резонансной томографии. Оценивается доступность и эффективность этих методов в проведении предстоящих экспериментов по изучению особенностей обонятельной рецепции человека.

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ПУТИ КОРРЕКЦИИ ТОКСИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА БЕТА-АМИЛОИДНОГО

ПЕПТИДА ПРИ ПОМОЩИ ФОСФОРСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ «КАПАХ» И «ФОСФАБЕНЗИД»

–  –  –

Казанский государственный медицинский университет, Казань, elvina2712@mail.ru Бета-амилоидный пептид (БАП) играет ключевую роль в патогенезе болезни Альцгеймера и ряда других нейродегенеративных заболеваний. БАП образует длинные нерастворимые фибриллы, которые откладываются в органах и тканях в виде сенильных бляшек, а также присутствует в организме в растворимой форме. БАП имеет широкий диапазон нейротоксических эффектов. Ранее нами было показано, что БАП обладает деполяризующим эффектом на скелетные мышечные волокна. Целью данной работы явился поиск фармакологических путей коррекции данного эффекта. Эксперименты проводились на диафрагме мыши. В экспериментах использовали фрагмент 25-35 БАП, содержащий функциональный домен полноразмерного пептида, необходимый для нейротоксических эффектов. Для коррекции эффектов БАП были использованы фосфорорганические соединения, обладающие нейротропной активностью - «КАПАХ» и «Фосфабензид». В ходе данной работы использовался метод внутриклеточной регистрации мембранного потенциала покоя (МПП). В контроле МПП скелетных мышечных волокон составил -70±0,8 мВ. После подачи раствора БАП в концентрации 10-6М развивался деполяризующий эффект, и к 120 минуте величина МПП снизилась до -40±0,7 мВ. КАПАХ и Фосфабензид в концентрации 10-4М и 10-7М практически не влияли на величину МПП. На фоне действия БАП (10-6М) КАПАХ в концентрациях 10-4М и 10-7М приводил к восстановлению величины МПП до контрольных значений. Фосфабензид на фоне действия БАП в концентрациях 10-4М и 10-7М также восстанавливал МПП. В следующих экспериментах БАП подавался на фоне действия препаратов КАПАХ и Фосфабензид. Так, на фоне действии КАПАХ в концентрации 10-4М БАП не оказывал деполяризующего эффекта. На фоне действия КАПАХ в концентрации 10-7М наблюдалась слабовыраженная деполяризация. На фоне действия Фосфабензида в концентрации 10-7М БАП вызывал небольшую гиперполяризацию мембраны. Таким образом, мы впервые показали новый токсический эффект БАП: сильное деполяризующее действие на плазматическую мембрану скелетного мышечного волокна. НейроФИЗИОЛОГИЯ ЖИВОТНЫХ тропные препараты КАПАХ и Фосфабензид препятствуют данному эффекту БАП. Полученные нами результаты являются основой для дальнейших исследований эффективности препаратов КАПАХ и Фосфабензид в качестве потенциальных средств для лечения нейродегенеративных заболеваний. Исследование поддержано государственным контрактом ФЦП 02.740.11.0302, грантами РФФИ 10-04-00883 и 09-04-99053.

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМА РАСПРОСТРАНЕНИЯ ИНДУЦИРОВАННОГО ОЖОГОМ ВАРИАБЕЛЬНОГО ПОТЕНЦИАЛА У ПРОРОСТКОВ ПШЕНИЦЫ

–  –  –

Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Н. Новгород, akinchits_elena@inbox.ru Потенциал действия (ПД) и вариабельный потенциал (ВП) являются стрессовыми сигналами у высших растении.

В отличие от ПД, возникающего при неповреждающем раздражении, ВП возникает в ответ на повреждение. ВП отличается от ПД большей длительностью, изменчивой формой и амплитудой, способностью возникать в период абсолютной рефрактерности и меньшей скоростью распространения. Его амплитуда и длительность в определённых пределах градуально зависят от интенсивности (площади) повреждения. Наиболее характерным качеством ВП является его способность проходить через убитые ткани и водный раствор, соединяющий полностью перерезанный стебель. Механизмы генерации и распространения ВП мало изучены. Существует три гипотезы распространения ВП: электротоническая, гидравлическая и химическая.

Целью работы является изучение механизмов распространения ВП.

Объектом исследования служили 15-20 дневные проростки пшеницы (Triticum sp.), выращенные гидропонным способом в климатической камере. Проросток располагали на подложке оптически когерентного микроскопа (Thorlabs). Одновременно проводилась регистрация электрической активности и ОКМ-сигнала из одной зоны.

Биоэлектрические реакции регистрировали от трёх точек экстраклеточным методом при помощи хлорсеребряных макроэлектродов. Генерацию ВП вызывали нанесением на кончик листа ожога открытым пламенем в течение 1-2 с. Для проверки химической гипотезы распространения ВП определяли скорость распространения радиоактивной метки по растению от места нанесения раздражения. У растений перед экспериментом были подрезаны кончики листа. В качестве радиоактивной метки использовался С14 в составе сахарозы. Сразу после раздражения кончик листа опускался в бюкс с раствором сахарозы. Инкубация растения в растворе составляла 100, 150 и 200 секунд. После инкубации в растворе лист растения разрезался на кусочки по 20 мм, из которых были приготовлены фиксированные препараты. Активность препаратов регистрировалась с помощью торцового счётчика МСТ-17 в свинцовом домике.

Было показано возникновение ВП у проростков пшеницы в ответ на ожог кончика листа открытым пламенем. По мере удаления от зоны раздражения амплитуда и скорость распространения медленной волны деполяризации значительно снижается. Такие характеристики ВП мало соотносятся с электротонической гипотезой. Поскольку для ПД, распространяющегося электротонически, характерна постоянная на всём протяжении скорость распространения. Для проверки гидравлической гипотезы регистрировали структурные изменения на расстоянии от зоны раздражения. Была зарегистрирована быстрая деформация листа, которая может отражать распространение гидравлического сигнала – волны повышенного давления. Тем не менее, было обнаружено несоответствие в скоростях распространения электрического и гидравлического сигналов, что противоречит гидравлической гипотезе. Это явление может быть объяснено с помощью химической гипотезы. Обнаружено, что радиоактивная метка способна распространяться по растению со скоростью, сопоставимой со скоростью распространения ВП. Полученные результаты указывают на возможность распространения ВП в соответствии с химической гипотезой.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант 09-04-97085).

АНТИОКСИДАНТНЫЕ И РАДИОПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА ИНОЗИН-5’-МОНОФОСФАТА

–  –  –

В настоящее время разработка и изучение новых способов защиты генома клеток млекопитающих от повреждений, вызванных окислительным стрессом, является актуальной задачей. С помощью различных тест - систем исследованы антирадикальные и радиозащитные свойства инозин-5’-монофосфата (ИМФ). С использованием специфичного для гидроксильных радикалов флуоресцентного зонда – кумарин-3-карбоновой кислоты - показано, что ИМФ уменьшает количество гидроксильных радикалов, генерируемых в водных растворах рентгеновским излучением (1 Гр) в несколько раз. Методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител к 8-оксогуанину показано, что ИМФ снижает образование этого повреждения в ДНК in

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

vitro при действии рентгеновского излучения примерно в 3 раза. При внутрибрюшинном введении, как до, так и после воздействия рентгеновского излучения в дозе 7 Гр, ИМФ влияет на выживаемость животных и содержание форменных элементов в периферической крови самцов мышей Kv:SHK. Особенно эффективным оказалось введение ИМФ вскоре после воздействия рентгеновского излучения. При введении ИМФ через 15 мин после облучения, оставались живыми в течение 30 дней приблизительно 60 % животных при 100% гибели в контроле. При этом ИМФ уменьшает тяжесть радиационной лейко- и тромбопении, а так же увеличивает количество гранулоцитов у облученных животных. С помощью микроядерного теста установлено, что ИМФ при внутрибрюшинном введении его после воздействия рентгеновского излучения в дозе 1,5 Гр приводит к уменьшению количества микроядер в полихроматофильных эритроцитах костного мозга мышей. Таким образом, ИМФ проявляет существенные антиоксидантные и радиопротекторные свойства и устраняет патологические последствия окислительного стресса.

Работа поддержана грантами Российского фонда фундаментальных исследований (10-04-00949-а; 10-04-00800-а) и Президента Российской Федерации для поддержки молодых российских ученых (МК-108.2010.4).

ГЕНЕРАЦИЯ КАЛЬЦИЕВЫХ СИГНАЛОВ В КОМПАРТМЕНТНОЙ МОДЕЛИ АСТРОЦИТА

–  –  –

Возникновение кальциевой активности в астроцитах в ответ на синаптические события в близрасположенных нейронах является интересным феноменом функционирования мозга и наблюдается экспериментально в срезах гиппокампа крыс. Астроциты, как и все клетки мозга, имеют крупное тело (называемое сомой) и многочисленные радиально расходящиеся от тела отростки. Астроциты не обладают свойствами электрической возбудимости, однако, способны генерировать паттерны химической активности, связанные с высвобождением кальция из внутриклеточных депо через каскад биофизических преобразований в ответ на изменение концентрации нейропередатчика во внеклеточном пространстве (синаптическая передача, спонтанный выброс нейропередатчика нейронами и астроцитами).

В работе предлагается математическая модель астроцита, учитывающая пространственную морфологию клетки, тело клетки и сеть отростков, на мембране которых расположены метаботропные глутаматные рецепторы, способные захватывать часть глутамата, выбрасываемого во внеклеточное пространство при синаптических событиях.

Для моделирования использовалась система трех взаимосвязанных уравнений, описывающих изменения концентрации кальция и инозитол-трифосфата (ИТФ) внутри клетки. Модель состоит из центрального элемента(сомы) и периферийных элементов(отростков). Элементы модели связанны между собой через внутриклеточную диффузию кальция и ИТФ. Исследованы базовые динамические режимы генерации сигналов на отростках астроцитов, вызванных активацией близлежащих синапсов. Введение шумового сигнала в уравнение, описывающее динамику внутриклеточной концентрации ИТФ, учитывало воздействие нейронов при локальных синаптических событиях. Изучены характеристики отклика в соме астроцита, возникающего за счет активации отростков, от дисперсии шумового сигнала.

Работа поддержана грантами РФФИ (08-02-00724, 08-04-97109, 09-04-01432), программой МКБ РАН и ФЦП “Научные и научно-педагогические кадры инновационной России” (контракт № 02.740.11.5089).

ФОРМИРОВАНИЕ ПРОМЕЖУТОЧНОГО СОСТОЯНИЯ АПОМИОГЛОБИНОМ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ФОСФОЛИПИДНОЙ МЕМБРАНЫ

–  –  –

Полипептидная цепь белка может принимать несколько видов конформационных состояний. Это нативное состояние с жёсткой упаковкой боковых групп, развёрнутое состояние, близкое по свойствам к статистическому клубку, и промежуточные состояния, свойства которых являются промежуточными между развёрнутым и нативным состояниями. Такие промежуточные состояния являются критическими в сети конформационных состояний белка. Переход белка в промежуточное состояние, на ряду с такими классическими денатурантами как мочевина или кислый рН, может вызывать и фосфолипидная мембрана. Её влияние важно как для мембранных

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

белков, так и для белков водорастворимых. Поэтому исследование деталей процесса взаимодействия глобулярного водорастворимого белка с мембраной представляется интересным и необходимым.

В качестве модельной системы было исследовано взаимодействие апомиоглобина с малыми бислойными везикулами, получаемыми из отрицательно заряженного пальмитоилолеилфосфотидилглицерина (POPG) или его смеси с нейтральным пальмитоилолеилфосфотидилхолином (POPC), путём ультразвукового облучения гидратированной фосфолипидной плёнки. Концентрация фосфолипидов в эксперименте составляла 1 мг/мл, концентрация белка 0.2 мг/мл. Эксперименты проводили при рН 6.2, 11оС.

Показано, что фосфолипидная мембрана стабилизирует промежуточное состояние апомиоглобина относительно нативного и развёрнутого и, вследствие этого, может выступать как умеренно денатурирующий агент для нативного состояния и как структурирующий для развёрнутого. Процесс взаимодействия проходит как минимум в две стадии. Общая его скорость зависит от удельного заряда мембраны и понижается с уменьшением доли отрицательно заряженных фосфолипидов. При исследовании взаимодействия мутантных форм апомиоглобина с везикулами показано, что скорость первой стадии хорошо коррелирует со стабильностью нативного состояния белка. По всей видимости, эта стадия соответствует денатурации белка под воздействием мембраны и его взаимодействию с везикулами. Скорость второй стадии мало зависит от замены и, скорее всего, соответствует перестройкам в структуре белка, уже связанного с фосфолипидной мембраной и лишённого своей плотной упаковки.

Работа поддержана программой МКБ РАН, грантами РФФИ(09-04-01348), ФАНИ(02.770.11.0295) и HHMI(55005607) А.В. Финкельштейна.

ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА НЕОРГАНИЧЕСКИХ МИКРОЧАСТИЦ РАЗЛИЧНОЙ

МОРФОЛОГИИ, ОБЛАДАЮЩИХ МАГНИТНЫМИ СВОЙСТВАМИ.

–  –  –

Казанский государственный университет, Казань, aidarradar@inbox.ru В последние годы приоритетными целями исследований являются синтез новых материалов, сочетающих в себе несколько полезных свойств, присущих нескольким разным материалам, а также модификация одних материалов другими. Учеными интенсивно изучается оксид железа Fe3O4 (магнетит) и карбонат кальция (CaCO3)- не токсичные для организма кристаллические вещества. Магнетит обладает суперпарамагнитными свойствами, что позволяет управлять им в пространстве в постоянном магнитном поле при помощи магнита, и использовать это в доставке лекарств в организме, разделении смесей биомолекул и других биомедицинских и биохимических целях.

Карбонат кальция- пористый полиморфный минерал с хорошими адсорбционными качествами по отношению к белкам и полисахаридам, который активно применяется в биотехнологии. В данной работе были совмещены полезные качества карбоната кальция и магнетита. В связи с этим была поставлена цель - получить неорганические микрокристаллы, обладающие магнитными свойствами, и изучить их свойства. Магнитные наночастицы были получены методом преципетации ионов двухвалентного и трехвалентного железа в присутствии аммиака, обработаны ультразвуком и стабилизированы цитрат-ионами. Следующим этапом, в присутствии магнитных наночастиц, были синтезированы микросферы и кубические микрокристаллы (кальцит) карбоната кальция. Полученные микрокристаллы карбоната кальция, модифицированные магнетитом, были изучены с помощью светового, поляризационного, электронного сканирующего микроскопов и магнитометра. Результаты этих исследований позволили убедиться в пористой кристаллической структуре и магнитных свойствах микрокристаллов, рассчитать их средний размер и изучить зависимость магнитных свойств микрочастиц от температуры среды.

ФЛЮОРЕСЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА В НОРМЕ И ПРИ НЕКОТОРЫХ

ОНКОПАТОЛОГИЯХ

–  –  –

Изменения на молекулярном уровне, вызванные различными факторами окружающей среды и модулирующие функциональные механизмы клеток могут быть инициатором развития ряда патологических состояний, в том числе раковых заболеваний, также могут рассматриваться в качестве первоначальных шагов адаптивных реакций всего организма. Метод флуоресцентного спектрального анализа (FSA) является одним из наиболее чувствительных методов, используемых для выявления молекулярных изменений в клетках. Этот метод весьма полезен в медицинских и экологических исследованиях. Он основан на факте, что некоторые из внутриклеточных соеди

<

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

нений (NADH, флавопротеиды) имеют характерные флуоресценции в видимой области спектра. Некоторые другие соединения, которые не имеют самостоятельной флуоресценции (белки, нуклеиновые кислоты), могут быть помечены конкретными флуорофорами Исследования проводились на спектрофлуориметре Shimadzu RF-5301 PC. Высокая чувствительность прибора достигается использованием светосильных монохроматоров и шумопонижающего цифрового фильтра в канале регистрации. Для калибровки под исследуемые биологические жидкости была проведена настройка оптимальной длины волны возбуждения и испускания изучаемых образцов. Скорость сканирования и автоматический затвор возбуждающего излучения позволяет быстро выполнять измерения и препятствует фоторазрушению образцов.

При работе в спектральном режиме была проведена регистрация спектров возбуждения и испускания с последующей обработкой спектров (определение максимумов и минимумов, определение измеряемой величины в выбранных точках, сглаживание, арифметические операции и логарифмирование, производные 1-4 порядка). В количественном режиме было проведено построение градуировочной кривой и расчет уравнения 1-3 порядка, усреднение измерений, а также определение неизвестных концентрации образцов.

В работе исследовали в сравнительном аспекте показатели флюоресцентного свечения эритроцитов группы здоровых людей и онкобольных с применением реактива флюоресцеина (ФЦ) для расширения возможности интерпритации результатов.

Показано, что в физрастворе максимум спектра флуоресценции с ФЦ находиться в области 589-596 нм. При встраивании флюоресцеина в мембраны эритроцитов онкобольных максимум спектра сдвигается в коротковолновую сторону до 568-579 нм с 2-х кратным возрастанием интенсивности, в то время как в мембранах здоровых людей максимум интенсивности приходиться на 589-596 нм. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о высокой чувствительности использованного подхода к изменениям структурного состояния биомембран и могут свидетельствовать в пользу его применения при оценке воздействия на эритроциты как различных онтогенетических, физико-химических, так и патологических состояний эритроцита.

УЧАСТИЕ ГЛЮКОЗОРЕГУЛИРУЕМОГО БЕЛКА 78 В РЕГУЛЯЦИИ РЕСПИРАТОРНОГО ВЗРЫВА

НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ ГИПЕР-И ГИПОГЛИКЕМИИ

–  –  –

Способность генерировать и высвобождать значительное количество активных форм кислорода (АФК) является уникальной способностью активированных нейтрофилов. Гиперпродукция АФК играет важную роль в прогрессии диабетических осложнений, включая нефропатию. В условиях постоянного изменения уровня глюкозы в крови, происходит усиление или снижение количества глюкозорегулируемого белка с массой 78 кДа (GRP78).

Уровень глюкозы в тканях организма широко варьирует при нормальном физиологическом состоянии организма и при заболеваниях. Зависимость функций нейтрофилов от уровня глюкозы мало изучена. Задачей данной работы было исследование роли глюкозы и GRP78 в поддержании спонтанной и индуцированной продукции АФК нейтрофилами, а также сравнение роли GRP78 в генерации АФК покоящимися и активированными нейтрофилами при варьировании условий по нагрузке клеток глюкозой. Произведено сравнение роли GRP78 в генерации АФК покоящимися и активированными нейтрофилами при варьировании условий по нагрузке клеток глюкозой.

Базовый уровень продукции АФК нейтрофилами в инкубационной среде без глюкозы, и в среде с 2-дезокси-Dглюкозой (2-ДОГ) был ниже, чем в среде с D-глюкозой. При активации респираторного взрыва ФМЛФ в концентрациях 0,1-50 мкМ наблюдали пониженные ответы нейтрофилов в среде с 2-ДОГ, по сравнению с ответами клеток в других средах. Максимальная амплитуда ответа наблюдалась у клеток в среде без добавления глюкозы.

При активации респираторного взрыва ФМЛФ в концентрации 50 мкМ наблюдали усиление экспрессии GRP78 и р38 МАРК (митоген активируемой протеинкиназы). Полученные результаты дают основание предполагать, что глюкоза и GRP78 вовлечены в генерацию АФК нейтрофилами.

РАЗРАБОТКА НОВЫХ СИСТЕМ ДОСТАВКИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ В КЛЕТКИ

ОПУХОЛИ

–  –  –

Казанский государственный университет, Казань, linara.gabitova@gmail.com

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

Одной из важнейших проблем современной медицины остаётся низкая эффективность химиотерапии онкологических заболеваний. В этих условиях всё более очевидной становится необходимость создания новых эффективных систем доставки лекарств в организм, которые позволили бы удлинить время действия препаратов на ткани, увеличить их биодоступность, обеспечить их направленный транспорт к очагу патологического процесса и уменьшить дозу и предотвратить побочные действия лекарств на организм. Одним из наиболее перспективных примеров систем контролируемой доставки лекарственных средств является класс Плуроников. К сожалению, Плуроники удовлетворяют не всем требованиям, предъявляемым к современным лекарственным формам. Поэтому поиск новых наноструктурных полимерных носителей продолжается.

Представляемый нами полимерный носитель ПЭ-240, является продуктом алкоголятной полимеризации окиси пропилена и образует в водных растворах ассоциаты размером 5.3±0.5 нм. На фоне коммерческих импортных Плуроников полиэфир ПЭ-240 обладает рядом преимуществ: большей активностью по сравнению с плурониками, меньшей стоимостью в 3-5 раз. Полиэфир в рассматриваемых концентрациях не образует мицеллы, следовательно, не будет вызывать фиброзных образований в организме.

В качестве модельной системы для изучения действия полиэфира как перспективного полимерного носителя мы рассматривали процесс транспорта гидрофобного флуоресцентного красителя родамина 6Ж в клетки дрожжей Rhodotorula glutinis в присутствии полиэфира в динамике. Наибольшие различия с контролем наблюдались после 30-и минутной инкубации с флуорофором.

Кроме того, была сделана оценка влияния полиэфира на фоне Плуроника L-61 на скорость поглощения родамина клетками дрожжей после двухчасовой инкубации. В результате было показано, что ПЭ-240 достоверно увеличивает поглощение гидрофобного родамина 6Ж дрожжами с нарушенной клеточной стенкой. В то же время L-61 оказался эффективней в случае интактной клеточной стенки. Плуроник L-61 является двуфункциональным соединением, содержащим две гидроксильные группы, в то время как полиэфир является полифункциональным соединением, что и объясняет процесс адсорбции полиэфира на полисахаридной капсуле дрожжей.

Плуроники используются в качестве систем доставки для противоопухолевых препаратов. Это натолкнуло нас на мысль о возможности исследования противоопухолевого эффекта полиэфира. Работы в этой области мы начали с изучения внутритканевого процесса накопления известного цитостатика рубомицина гидрохлорида опухолью пищевода. Было показано, что полиэфир достоверно увеличивает проникновение рубомицина гидрохлорида в опухоль по сравнению с контрольным вариантом.

Кроме того, был проведён анализ поглощения флуоресцентного красителя родамина 6Ж в клетки опухоли линии HeLa в присутствии полиэфира. Было показано, что полиэфир увеличивает проникновение флуорофора в опухолевые клетки на 10 минуте инкубации.

Таким образом, на сегодняшний день показано, что полиэфир ПЭ-240 достоверно увеличивает проницаемость мембран клеток различной этиологии, в том числе, опухолевых, а также опухолевых тканей.

ИССЛЕДОВАНИЕ ТОКСИЧНОСТИ IN VITRO СУБМИКРОННЫХ ЧАСТИЦ НА ОСНОВЕ СОПОЛИМЕРА МОЛОЧНОЙ И ГЛИКОЛЕВОЙ КИСЛОТ СО ВКЛЮЧЕНИЕМ ПАКЛИТАКСЕЛА.

–  –  –

Включение лекарственных веществ в частицы субмикронных размеров способно существенно улучшить некоторые фармакокинетические параметры препаратов. Из-за непроницаемости стенок капилляров в норме для частиц размером более 25 нм увеличивается относительная концентрация препарата в плазме крови и время его полувыведения. В то же время субмикронные частицы могут выходить из кровяного русла и образовывать депо лекарственного вещества в местах воспалений или опухолей в результате расширения пор и повреждения стенок капилляров. Скорость деградации препарата, включенного в состав полимерной матрицы, заметно ниже, чем в свободной форме. Высвобождение лекарственного вещества из состава частиц происходит постепенно, по мере гидролиза полимера, в результате чего достигается пролонгация действия препарата. Исходя из данных предпосылок, нами был разработан метод включения паклитаксела в состав субмикронных частиц на основе биодеградируемого сополимера молочной и гликолевой кислот. Паклитаксел является цитостатическим противораковым препаратом растительного происхождения из группы таксанов. При таких злокачественных опухолях, как рак яичников, рак молочной железы, паклитаксел входит в стандарты лечения, а также активно используется в комбинированной химиотерапии при немелкоклеточном раке легкого. Его применение сопряжено с такими недостатками, как малый период полувыведения, высокая общая токсичность, а также широкий спектр побочных эффектов. Эти недостатки могут быть компенсированы преимуществами субмикронной лекарственной формы препарата. Включение паклитаксела в состав полимерных частиц производилось с помощью метода эмульсификации-упаривания с использованием в качестве модификатора поверхности поливинилового спирта. Этот метод

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

основан на способности используемого полимера образовывать пленку на границе раздела фаз. Эффективность включения препарата в состав полимерной матрицы составила 71,6% при исходном соотношении полимер/препарат, равном 10. Частицы со включенным паклитакселом имели размер порядка 900 нм и обладали сферической формой. Также была оценена токсичность полученной лекарственной формы препарата по сравнению с исходной субстанцией для опухолевых клеток аденокарциномы молочной железы мыши линии Ca755 по стандартному МТТ-тесту. Результаты теста показали, что паклитаксел в составе полимерных частиц не только сохраняет токсичность для опухолевых клеток (IC50=7,5 нг/мл), но и является более токсичным, чем свободный препарат (IC50=21.9 нг/мл). При этом токсичности аналогичных полимерных частиц без включения препарата в исследуемом диапазоне концентраций обнаружено не было. Таким образом, полученная нами лекарственная форма паклитаксела представляет собой интерес для дальнейших испытаний.

ОКИСЛИТЕЛЬНАЯ МОДИФИКАЦИЯ БЕЛКОВ В ОЦЕНКЕ ПРОГНОЗА ИСХОДА ЗАБОЛЕВАНИЯ У

ПАЦИЕНТОВ С ОПУХОЛЯМИ ОРОФАРИНГЕАЛЬНОЙ ЗОНЫ

–  –  –

Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Н.Новгород, dav-dina@yandex.ru Несмотря на определенные успехи методов лучевой и химиотерапии лечение онкологических больных носит эмпирический характер. Поэтому вопросы индивидуализации лечения и поиска новых надежных прогностических факторов его эффективности наиболее актуален (Проценко С.А., 2007). В связи с этим представляет интерес изучение возможностей оценки состояния про-антиоксидантной системы организма в определении прогноза исхода заболевания и эффективности его лечения.

Цель работы: оценить в крови больных с опухолями орофарингеальной зоны до лечения уровень окислительной модификации белков (ОМБ).

Материалы исследований. Обследовано 80 пациентов с опухолями полости рта и глотки III и IV стадий в возрасте 54±15лет, которые были сопоставимы по локализации, стадии, возрасту, морфологии опухоли. Им был запланирован курс полихимиотерапии по схеме 5-фторурацил+цисплатин, затем 2 этапа химиолучевого лечения до суммарно-очаговой дозы 68-70Гр.

Окислительную модификацию белков определяли по уровню спонтанных и Fe2+-индуцированных альдегид- и кетондинитрофенилгидразонов (АДНФГ, КДНФГ) (Levine, 1990; модификация Е.Е. Дубининой,1995).

Результаты и их обсуждения. В процессе анализа результатов было выявлено, что в зависимости от исходного уровня исследуемых показателей свободнорадикального окисления пациенты разделились на 2 группы. У 42 больных уровень спонтанно окисленных АДНФГ составил 0,0049±0,0009; КДНФГ - 0,0037±0,0005. При металлиндуцированном окислении уровень АДНФГ составил 0,0141±0,0017; КДНФГ - 0,0082±0,0014. Эти больные завершили лечение в соответствии с планом, отмечалась частичная или полная ремиссия, а прогрессирование возникало не ранее, чем через 12 месяцев после окончания лечения. У тридцати восьми пациентов уровень спонтанно окисленных АДНФГ в среднем был равен 0,0105±0,0026; КДНФГ - 0,0047±0,0007. При металлиндуцированном окислении уровень АДНФГ составил 0,0212±0,0014; КДНФГ - 0,0284±0,0103. Из этих пациентов только четырнадцать завершили лечение в соответствии с планом. У 24 из них химиолучевая терапия было прервана в связи с прогрессированием заболевания и развития побочных эффектов. Все больные, вошедшие в эту группу, умерли в течение 12 месяцев с момента начала лечения.

Выводы: Таким образом, уровень ОМБ в плазме крови больных с опухолями орофарингеальной зоны характеризует состояние окислительного стресса и отражает индивидуальные особенности организма, что в дальнейшем может быть использовано для прогнозирования исходов заболевания.

–  –  –

Нижегородский государственный технический университет им. Р.Е. Алексеева, Н. Новгород, golubmay@mail.ru Развитие нанотехнологий ведет к появлению множества материалов на совершенно новом уровне. Тонкоплёночные покрытия из диоксида титана получили свое распространение благодаря их антибактериальным и фотокаталитическим свойствам. В настоящее время они используются для фотокаталитической стерилизации в медицинской и пищевой промышленности, а так же для решения экологических проблем В данной работе была

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

исследована динамика ингибирования КОЕ S. aureus 956 на поверхности повторно оттоженных TiO2 – плёнок индуцированных ультрафиолетом. Плёнки были синтезированы методом золь-гель технологии с последующим отжигом при 450С в течении 5 часов. После их использования, они повторно отжигались при 500С в течении 4 часов. Для бактериологических экспериментов использовали суточную культуру S. аureus 956, которую смывали физиологическим раствором и взвешивали в конечной концентрации 10 МЕ. Затем готовили разведения с целью получения изолированных колоний в количестве 200-300 КОЕ на чашке Петри. Бактериальную суспензию в количестве 0,7 мл вносили на чашку Петри без плёнки (контроль) и на чашку Петри с нанесённой TiO2 – плёнкой (опыт). Облучение проводили под УФ лампой с разной временной экспозицией. Затем, облученые бактерии в количестве 0,05 мл высевали на чашки Петри с мясо-пептоннным агаром (МПА) в двух повторностях. После 24 часов инкубации при 37 С, было подсчитано число КОЕ. Для проведённых экспериментов была установлена динамика фотоиндуцированной бактерицидности на поверхности TiO2 – плёнок. При инкубации в течении 15 минут были получены следующие результаты: контроль 156,5±12,5*, опыт 111,5±8,5*; для 30 минут: контроль 127,5±2,5*, опыт 43±3* ; для 45 минут: контроль 72±1*, опыт 19,5±11,5*; для 60 минут: контроль 91,5±10,5*, опыт 3,5±0,5* (* р0,05 – различия статистически значимы). Из полученных данных видно, что при воздействии УФ света на поверхность TiO2 – плёнки при часовой инкубации приводит к полному ингибированию жизнеспособности микроорганизмов. Возможный механизм реализации бактерицидного эффекта TiO2-пленок может быть следующим. В результате УФ- облучения TiO2-плёнок образуются высокореактивные окислительные радикалы, такие как OH·, O2·, HO2·, которые инактивируют клетку по двум предполагаемым механизмам: а) окисление и разрушение клеточной стенки и мембраны с последующей дезинтеграцией клетки и б) их диффузия в клетки, приводящая к инактивации ферментов, повреждению органелл, нарушению синтеза белка и т.д. После возбуждения светом, длина волны которого составляет менее 385 нм, энергия фотона генерирует пары электрон - дырка на поверхности TiO2. Отверстия в зоне проводимости могут реагировать с H2O или гидроксид ионами, которые адсорбируясь на поверхности, производят гидроксильные радикалы (ОН·), супероксид ионы (O2-. ). Формирование активных форм кислорода доказано методом ЭПР.

ОПТИМАЛЬНАЯ ФОРМА ВНЕШНЕГО СИГНАЛА ДЛЯ АКТИВАЦИИ СИСТЕМЫ БОНХОФФЕРА –

ВАН ДЕР ПОЛЯ

–  –  –

Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Н.Новгород, sv.grigoryeva@gmail.com Нарушения ритма сердца являются одной из основных причин внезапной сердечной смерти. Клинический арсенал предупреждения и лечения аритмий включает в себя фармакологические и хирургические методы, a также методы электрической стимуляции. Главная цель современной кардиостимуляции - успешно восстановить нормальный ритм сердца после его остановки наименьшим разрядом, чтобы избежать повреждения миокарда, которое часто наблюдается при использовании высоких энергий. В связи с этим, мы наблюдаем феномен "стрелы Аримана" - с одной стороны, нельзя допустить, чтобы разряд был слишком большим, но с другой стороны слишком малый разряд сам по себе не способен восстановить работу сердца. Это остается справедливым и для длительности внешнего воздействия. В связи с этим в данной работе были решены две задачи: 1) задача быстродействия (отыскание формы внешнего сигнала, который за наикратчайшее время с заданным ограничением на количество энергии активирует аппроксимированную систему Бонхоффера - Ван дер Поля); 2) задача минимизации количества энергии (отыскание формы внешнего сигнала, который за минимальное количество энергии при фиксированном времени активирует аппроксимированную систему). За остановку сердечного ритма принималось нахождение системы в состоянии равновесия, а за активацию – вывод системы из состояния равновесия на линию быстрого движения, которая обеспечивала бы переход на другую крайнюю ветвь N-изоклины. Аппроксимированная левая ветвь N-изоклины проходит через состояние равновесия исходной (не аппроксимированной) системы и локальный минимум. Способ определения оптимального управления, основанный на использовании необходимых условий оптимальности, состоит из следующих шагов.

1. Из условия стационарности находим управление в виде функции времени и множителей Лагранжа. 2. Находим решение сопряженной системы. 3. Находим уравнение оптимальной траектории. Выводы: 1. Чем ближе значение состояния равновесия к значению в локальном минимуме, тем больше нам необходимо времени (при одном и том же количестве энергии) для активации системы. 2. С уменьшением подаваемого количества энергии внешнего сигнала увеличивается время его действия. 3. Было обнаружено, что имеется асимптотическое значение количества подаваемой энергии такое, что при меньшем значении, чем оно система никогда не сможет быть активирована.

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

ВЛИЯНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ ТРИАЗОЛА И ОКСАЗОЛИДОНА НА ОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ

–  –  –

Производные триазола и оксазолидона относятся к классу гетероциклов. Подобные вещества применяются для создания биологически активных соединений. Спектр действия данных веществ достаточно широк: они известны как противомикробные, противовирусные, противогрибковые, противоопухолевые агенты.

Настоящее исследование проводилось с целью изучения цитотоксических (потенциальных противоопухолевых) свойств новых соединений, содержащих в своей структуре производные триазола либо окзазолидона, объединенные с морфолином или пиперидином линкерными группировками различной структуры.

Исследование проводилось на опухолевых клетках линии HeLa (аденокарцинома шейки матки человека) с помощью МТТ-теста и проточной цитофлуориметрии после окрашивания ДНК йодистым пропидием.

По МТТ-тесту получены кривые «доза-эффект» и вычислены концентрации IC50 для данных комплексов.Обнаружено, что соединения, объединяющие триазол и морфолин, либо бензотриазол и морфолин, проявляют цитотоксическую активность с IC50 около 100-150 мкМ только в том случае, если в качестве линкерной группировки используется группировка –CH2–, тогда как соединения с линкером структуры –CH2–NNO–CH2– CO– в данной дозе не проявляли цитотоксичности.

Соединения, содержащие оксазолидон и морфолин или пиперидин, также проявляют цитотоксическую активность с IC50 около 100-150 мкМ. При раздельном применении окзазолидон или морфолин не проявляют цитотоксичности в этих концентрациях.

По результатам проточной цитофлуориметрии после окрашивания ДНК йодистым пропидием было обнаружено, что цитотоксичные производные триазола и оксазолидона изменяют профиль клеточного цикла. При использованных дозах соединений (IC50 для клеток HeLa) этот эффект, в основном, проявляется в торможении клеточного цикла в фазе G1, о чем свидетельствует снижение количества клеток в пике G2/M и увеличении количества клеток в пике G1/G0 клеточного цикла. Соединение, содержащее пиперидин, вызывет также накопление погибших клеток в sub-G1 области.

–  –  –

Дубасова1 Л. В., Павлова2 Е. А., Голубев А. Н.

Нижегородский государственный технический университет им. Р.Е. Алексеева, Н. Новгород, tlv-nn@yandex.ru Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Н. Новгород Одним из перспективных подходов к лечению поверхностных и неглубоко залегающих раковых опухолей, является фотодинамическая терапия. В основе метода лежит избирательное накопление фотоактивных веществ в опухолевых тканях с их последующим облучением в одном из максимумов поглощения фотосенсибилизаторов (ФС). При облучении ФС происходит образование активных форм кислорода, посредством которых реализуется цитотоксическое действие. Эффективность ФС зависит от чувствительности компартментов клеток к подобному воздействию, от влияния поврежденных клеточных структур на жизнеспособность клетки в целом. Целью нашей работы было исследование накопления и внутриклеточного распределения ФС различных типов на клеточных культурах.

В работе были использованы клеточные линии Chang Liver – нормальные гепатоциты, SK-НЕР-1 – аденокарцинома печени. Исследуемые ФС – препараты второго поколения «Фотодитазин» (НПК «Вета-Гранд», Россия), «Фотосенс» (ФГУП «ГНЦ «НИОПИК», Россия), «Аласенс» (ФГУП «ГНЦ «НИОПИК», Россия). Для оценки динамики суточного накопления ФС использовали проточный цитофлуориметр FACScalibur (Becton Dickinson, USA). Визуализацию внутриклеточного накопления и распределения осуществляли с помощью системы лазерной сканирующей микроскопии LSM 510 META (Carl Zeiss GmbH, Jena, Germany). Исследование внутриклеточной локализации ФС проводили с помощью флуоресцентных красителей на митохондрии, лизосомы, аппарат Гольджи и ЭПР.

Было установлено, что в первые 4 часа инкубации накопление препарата «Фотодитазин» одинаковое в нормальных и опухолевых клетках, однако, в последующие 20 часов наблюдается статистически значимая разница в уровне флуоресценции. Препарат «Фотосенс» в течение 24 ч накапливается одинаково вне зависимости от типа

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

клеток. Для аласенс-индуцированного протопорфирина IX характерно накопление преимущественно в опухолевых клетках, что объясняется их биохимическими особенностями.

Визуализация распределения ФС внутри клетки показала, что препарат «Фотосенс» располагается преимущественно в везикулах и в большей степени локализуется в лизосомах. «Фотодитазин» и аласенс-индуцированный протопорфирин IX накапливаются в пренуклеарной области, прокрашивают клеточные мембраны и диффузно распределяются по цитоплазме. При окраске органелл выявлено, что данные фотоактивные вещества локализуются преимущественно в митохондриях, а также частично в ЭПР и аппарате Гольджи.

В результате выполненной нами работы установлены различия в динамике накопления экзогенных препаратов («Фотодитазин», «Фотосенс») и эндогенно синтезируемого протопорфирина IX, а также выявлены существенные отличия в их внутриклеточной локализации.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проект 08-02-99049) и программы Президиума РАН «Фундаментальные науки – медицине»

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПОЛИЭФИРА ПЭ-240 ПО ОТНОШЕНИЮ К КЛЕТКАМ

ГОЛОВНОГО МОЗГА МЫШЕЙ ЛИНИИ C57BL6 В ПОДОСТРОМ ОПЫТЕ IN VIVO

–  –  –

Разработка и внедрение инновационных лекарственных форм является приоритетной задачей фарминдустрии.

Современные препараты должны обладать более длительным временем действия, большей биодоступностью, должен быть обеспечен их направленный транспорт к очагу патологического процесса и при этом уменьшение дозы и предотвращения побочных действий лекарств на организм Наиболее остро перечисленные качества необходимы для ЛС с выраженным побочным действием (большинство противоопухолевых препаратов) и лекарств, действующих на центральную нервную систему: наркотические анальгетики, средства лечения болезни Альцгеймера и др., т.е. лекарственных агентов, действие которых требует преодоления гематоэнцефалического барьера.

Использование полимерных систем доставки лекарственных средств позволяет повысить терапевтическую активность препаратов при снижении дозы активной субстанции.

Данное исследование составляет часть доклинических испытаний нового полимерного носителя ПЭ-240, разработанного Химическим институтом им. А. М. Бутлерова и включает в себя выявление фармакологической активности ПЭ-240.

для изучения системного действия полиэфира как перспективного полимерного носителя были использован головной мозг мышей линии C57Bl6, получавших ПЭ-240 per os в дозах 1мг/кг, 5 мг/кг и 10 мг/кг. В ходе работы мы исследовали воздействие ПЭ-240 на проницаемость клеток головного мозга мышей, спектрофотометрическим методом. В результате было обнаружено, что проницаемость клеток мозга опытных групп для АС-3 достоверно выше контрольной. При этом между группами получавших ПЭ-240 дозами 1мг/кг, 5мг/кг,10 мг/кг значимые различия не обнаружены. Что позволяет сделать вывод о том, что ПЭ-240 в дозах 1, 5, 10 мг/кг повышает проницаемость клеток головного мозга для спектрального препарата АС-3 у мышей.

Также в ходе работы была установлена ДНК-повреждающая активность ПЭ-240 по отношению к клеткам головного мозга мышей методом Comet assay. В результате было получено, что ПЭ-240 в дозе 10 мк/кг обладает ДНКповреждающей активностью.

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ РАКОВЫХ КЛЕТОК C ЗОЛОТЫМИ НАНОЧАСТИЦАМИ IN

VITRO Елагин В.В.1, Брилкина А.А.2, Верюгин Б.В.3, Сергеева Е.А.4 Нижегородская государственная медицинская академия, Н.Новгород Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Н.Новгород Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова Российской академии наук, Москва Институт прикладной физики Российской академии наук, Н.Новгород, elagin.vadim@gmail.com В настоящее время широко исследуется возможность использования золотых наночастиц в качестве диагностических и терапевтических агентов в онкологии. Наибольший интерес связан с возможностью их направленной доставки в патологическую зону с использованием антител. Однако вопрос взаимодействия клеток с наночасти

<

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

цами остается до конца не изученным. В связи с этим целью работы являлось исследование взаимодействия раковых клеток in vitro с золотыми наночастицами, имеющими различные покрытия. В работе были использованы золотые наночастицы сферической формы, конъюгированные с мини-антителами 4D5 scFv, специфичными к рецептору HER2/neu, и наночастицы в форме стержней, покрытые полиэтиленгликолем (ПЕГ) с молекулярным весом 6000 Да и 40000 Да. В качестве модели клеток-мишеней были использованы линии клеток аденокарциномы яичника человека (SKOV3) и рака молочной железы (SKBR3), гиперэкспрессирующие маркер HER2/neu. В качестве контроля использовали HER2-негативные линии раковых клеток HeLa и клеток яичника китайского хомячка (СНО). Исследование взаимодействия клеток с наночастицами проводили с помощью конфокальной флуоресцентной, темнопольной и двухфотонной флуоресцентной микроскопии. Показано, что наночастицы золота, не конъюгированные с мини-антителами, взаимодействуют с клетками неспецифически. Они подвергаются интернализации в клетки всех исследуемых линий. Большое количество наночастиц обнаружено в цитоплазме клеток. Для комплексов наночастиц золота и мини-антител scFv 4D5 установлена специфичность взаимодействия c HER2-рецепторами на клеточной поверхности SKOV3 и SKBR3. При обработке HER2-негативных клеток CHO и HeLa этим же комплексом наночастиц на мембране клеток и в цитоплазме не наблюдалось. Обработка клеток конъюгатами наночастиц с неспецифическим белком барназой не приводила к взаимодействию их с поверхностью клеток и проникновению в цитоплазму клеток. Методом двухфотонной флуоресцентной микроскопии установлено, что наночастицы покрытые ПЕГ с молекулярным весом 40000 Да, не способны проникать в клетки и располагаются на их поверхности, тогда как частицы с ПЕГ 6000 свободно проникают внутрь клеток.

Таким образом, с помощью темнопольной и конфокальной микроскопии было показано, что конъюгаты наночастиц золота с мини-антителами 4D5 scFv специфически связываются с HER2-позитивными раковыми клетками и не взаимодействуют с контрольными HER2-негативными клетками. Наночастицы не конъюгированные с антителами интернализуются в клетки всех исследуемых линий Методом двухфотонной флуоресцентной микроскопии выявлено, что частицы, покрытые ПЕГ с высоким молекулярным весом, не способны проникать в клетки.

Работа выполнена при финансовой поддержке Федерального агентства по науке и инновациям (№ 02.740.11.0713, МД-3018.2009.7) и РФФИ (проекты № 09-02-97072, 09-02-12215, 09-02-00539).

–  –  –

Сохранение нервной ткани с помощью глубокого замораживания при температуре жидкого азота и создание трансплантатов нервной ткани неразрывно связано с нейромедициной. Модель простой нервной системы беспозвоночного моллюска Lymnaea stagnalis позволяет адекватно оценить возможность практической реализации метода криоконсервации нервной ткани на системном и клеточном уровнях.

Исследования проводились на нейронах изолированного мозга прудовика Lymnaea stagnalis. Замораживаниеоттаивание осуществляли со скоростями 400-500°С/мин, с 2М диметилсульфоксидом. Жизнеспособность нейронов изучали как на целом кольце ганглиев, так и на изолированных нейронах. Микроэлектродным методом отведения биопотенциалов на изолированном кольце ганглиев оценивали электрофизиологическое состояние мембран нейронов и сохранность межклеточных связей. Ферментативную активность клеток тестировали методом флуоресцентного витального окрашивания. Методом клеточной культуры in vitro анализировали способность изолированных нейронов формировать отростки de novo.

При окрашивании криоконсервированного целого мозга LIVE/DEAD (Sigma, США), тестирующего целостность клеточной мембраны (этидиумбромид) и внутриклеточную эстеразную активность (кальцеин АМ), тела нейронов флуоресцировали в зеленом диапазоне спектра (ex/em ~495/~515 nm).

Микроэлектродным методом отведения биопотенциалов через 1.5-2 часа после оттаивания мозга были выявлены нейроны со спонтанной активностью и обнаружены сигналы возбуждающих постсинаптических потенциалов (ВПСП). Измерены мембранные потенциалы отдельных нейронов, потенциалы действия; проанализирована реакция нейронов на дофамин. Электрофизиологическая активность нейронов изолированной оттаянной нервной системы прудовика сохранялась в течение 16 суток органотипического культивирования.

Методом культуры in vitro было показано, что нейроны, выделенные из оттаянного мозга моллюска, сохраняют способность формировать нейриты и образуют нейрональные сети подобные тем, что формируют нейроны, не прошедшие криоконсервацию.

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

Таким образом, после глубокого замораживания в жидком азоте нами проанализирована жизнеспособность нейронов простой нервной системы изолированного мозга моллюска. Практическая реализация метода криоконсервации нервной ткани на системном и клеточном уровнях имеет реальное развитие в ближайшем будущем.

Работа выполнена при поддержке ФСМФП (конкурс УМНИК) № 6639р/91064; РФФИ №10-04-01319-а.

БИОКОНЪЮГАТЫ С ЛЮМИНИСЦЕНТНЫМИ НАНОАЛМАЗАМИ НА ОСНОВЕ МОДУЛЯ

БАРНАЗА:БАРСТАР Ивукина Е.А., Sreenivasan V.K.A., Стремовский О.А., Звягин А.В., Деев С.М.

Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова, Москва, katya.ivukina@rambler.ru MQ Photonics Centre, Faculty of Science, Macquarie University, Sydney, Australia Люминисцентные наноалмазы представляют собой ультрадисперсную разновидность углеродной фазы. Эти наночастицы, благодаря присутствию в их ядрах азот-вакантных центров, обладают уникальными оптическими свойствами. При возбуждении лазером с длиной волны 532 нм они флуоресцируют в красной области спектра с максимумом в районе 680 нм. Химически активные функциональные группы, присутствующие на поверхности наноалмазов, обеспечивают возможность использования этих частиц в составе биоконъюгатов для диагностики различных заболеваний. К особым преимуществам наноалмазов относят их чрезвычайную фотостабильность, химическую устойчивость к агрессивным факторам, механическую прочность и биосовместимость.

В данной работе была изучена возможность создания биоконъюгатов с люминисцентными наноалмазами для их направленной доставки к биологическим маркерам.

В качестве основы для создания конъюгатов мы использовали модуль барназа:барстар. Бактериальная рибонуклеаза барназа и ее природный ингибитор барстар – небольшие белки, (12 и 10 кДа соответственно), формирующие исключительно прочный комплекс с константой диссоциации Kd~10-14 М, который стабилен в широком диапазоне солевых концентраций и pH.

Используя люминисцентные наноалмазы диаметром 140 нм, мы получили ковалентные конъюгаты с барстаром, расположенным с высокой плотностью по всей поверхности частиц.

Последующее добавление рекомбинантного белка слияния барназы с зеленым флуоресцентным белком EGFP, привело к формированию комплекса наноалмаз-барстар:барназа-EGFP.

Присутствие в препарате как EGFP, так и наноалмазов, было подтверждено наличием двух пиков флуоресценции, характерных для данных флуорофоров. Среднее количество молекул EGFP, приходящееся на одну частицу, составило 1300 единиц.

Успешное взаимодействие компонентов реакции было также продемонстрировано методом динамического светорассеяния, с помощью которого было показано последовательное повышение zeta-потенциала. Полученные нанокомплексы проявили стабильность в физиологических условиях, что является важным показателем для их применения in vivo.

Таким образом, на основе модуля барназа:барстар нами была получена прочная надмолекулярная конструкция наноалмазов с белками, обладающая высокой устойчивостью в физиологических условиях. При дальнейших исследованиях отработанная методика может быть использована для создания биоконъюгатов люминисцентных наноалмазов с различными антителами против биологических маркеров.

ИЗМЕНЕНИЕ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ В ПРОЦЕССЕ РАЗВИТИЯ НЕЙРОГЛИАЛЬНОЙ

СЕТИ В ДИССОЦИИРОВАННОЙ КУЛЬТУРЕ.

–  –  –

Нижегородская государственная медицинская академия, Н.Новгород, alenaisakova@rambler.ru Формирующиеся в процессе развития диссоциированных культур нейроглиальные сети являются адекватной моделью функциональных нейроглиальных сетей головного мозга. После диссоциирования, в процессе развития, клетки de novo формируют функциональные сети, которые способны проявлять спонтанную спаечную и пачечную электрофизиологическую активность. Увеличение метаболической активности клеток в культуре приводит к качественному и количественному изменению состава культуральной среды. Подробное изучение динамки изменения метаболических показателей в первичной культуре может помощь в понимании процессов восстановления функциональных сетей головного мозга. Целью нашей работы явилось изучение динамики изменения ме

<

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

таболических показателей нейроглиальной сети. Для достижения поставленной цели были сформулированы следующей задачи: изучение функциональной активности нейроглиальной сети; исследование изменения концентрации основных метаболических показателей (глюкозы, лактата, общий белок). В исследовании использованы культуры клеток гиппокампа, полученные от 18-дневных эмбрионов белых беспородных мышей. Для исследования функциональной активности нейроглиальной сети in vitro использовали мультиэлектродную систему MED64. Метаболические показатели (глюкоза, лактат, общий бело) определялись в культуральной среде в течение 30 дней культивирования с помощью диагностических наборов Vital Diagnostic.

Показано, что в процессе культивирования диссоциированных культур гиппокампа изменение электрофизиологической активности сопровождается потреблением глюкоза и накоплением лактата в культуральной среде. Обнаружена зависимость между концентрацией лактата и электрофизиологической активностью. Таким образом, появление лактата в культуральной среде может свидетельствовать об активной метаболической активности клеток головного мозга.

ИЗМЕНЕНИЕ АСТРОЦИТАРНОЙ СА2+ АКТИВНОСТИ В ПЕРЕЖИВАЮЩИХ СРЕЗАХ ГИППОКАМПА КРЫС ПОД ДЕЙСТВИЕМ РАЗНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ГЛУТАМАТА

–  –  –

Обработка информации в мозге связана с активностью нейронов, но недавние исследования показали, что астроциты также влияют на этот процесс. Астроциты - это электрически невозбудимые клетки, которые способны генерировать Са2+ сигналы, которые, в свою очередь, могут регулировать локальный кровоток. Было показано, что астроциты экспрессируют метаботропные рецепторы глутамата. В связи с этим, глутамат рассматривается как один из основных передатчиков в нейрон-астроцитарных взаимодействиях.

В работе проводились исследования Са+ сигналов в астроцитах, индуцированных различными концентрациями экзогенного глутамата. Эксперименты проводились на переживающих срезах гиппокампа крыс. Уровень Са+ в астроцитах оценивался по уровню флуоресценции Oregon Green 488 BAPTA 1. Астроциты идентифицировались с помощью специфического флуоресцентного маркера сульфородамин 101. В работе был использован лазерный сканирующий микроскоп Carl Zeiss LSM 510 Duoscan. Записи изменения флуоресценции велись в режиме полного кадра, с цифровым разрешением 256х256 пикселей, частотой сканирования 1Гц и пространственным разрешением 400х400 мкм. Флуоресценция индикаторов регистрировалась в диапазонах 500-530 (Oregon Green 488 BAPTA 1), 650-710 нм (сульфородамин 101). Данные обрабатывали с помощью оригинального программного пакета. В данной работе было показано, что при добавлении небольших концентраций глутамата (0,7 и 1 мкмоль) в астроцитах повышается частота Са+ событий, а при добавлении 10 мкмоль глутамата значительно повышается базовый Са+ уровень. Также при добавлении глутамата увеличивалось количество активных астроцитов в срезе. Амплитуда и длительность кальциевых сигналов не изменялись.

Полученные данные демонстрируют связь между внеклеточной концентрацией глутамата и активностью астроцитов. Увеличение внеклеточной концентрации глутамата может происходить при повышенной активности мозга, например во время исследовательского поведения. Наши данные указывают, что такое повышение глутамата должно привести к повышению Са2+ активности астроцитов. Мы предполагаем, что эта зависимость является механизмом усиления внутримозгового кровообращения при повышении активности мозга.

Работа поддержана РФФИ (08-02-00724, 08-04-97109, 09-04-01432, 09-04-12254-офи_м), программой МКБ Президиума РАН, грантом Роснауки 2.1.1/6223 Аналитическая ведомственная целевая программа "Развитие научного потенциала высшей школы (2009-2010 гг.)

ПРИЖИЗНЕННАЯ ОЦЕНКА ДИНАМИКИ ИЗМЕНЕНИЙ МЯГКИХ ТКАНЕЙ ПОЛОСТИ РТА В ХОДЕ

ФРАКЦИОННОГО ЛАЗЕРНОГО ФОТОТЕРМОЛИЗА

В ЭКСПЕРИМЕНТЕ НА ЖИВОТНЫХ МЕТОДОМ КРОСС-ПОЛЯРИЗАЦИОННОЙ ОПТИЧЕСКОЙ

КОГЕРЕНТНОЙ ТОМОГРАФИИ

Карабут М.М., Киселева Е.Б., Фомина Ю.В., Мураев А.А., Евдокимова О.С., Снопова Л.Б., Гладкова Н.Д.

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

Нижегородская государственная медицинская академия, Н.Новгород, maria.karabut@gmail.com Метод фракционного лазерного фототермолиза (нанесение матрицы из микроскопических тепловых лазерных ранок, окруженных неповрежденной тканью) приобрел большую популярность в практической медицине и косметологии, поскольку уровень повреждения ткани и связанные с этим побочные эффекты значительно уменьшаются за счет сочетания высокой эффективности и минимальной инвазивности процедуры. Учитывая существующий опыт применения фракционного метода, предполагается получить аналогичную восстановительную реакцию мягких тканей полости рта. Использовался диодный лазер на длине волны 980 нм, генерирующий излучение мощностью 18 Вт с продолжительностью единичного импульса 150 и 250 мс. Каждая колонка создавалась при контакте сапфирового наконечника диаметром 400 мкм с тканью. Эксперименты проводились на 5 новозеландских кроликах. Лазерные колонки наносились рядами (по 2-3 колонки) на слизистую верхней и нижней челюсти в области резцов. Биопсийный материал, взятый из области колонок на 1-30 день, окрашивался гематоксилин – эозином, по Ван-гизону, на лактатдегидрогеназу и пикросириусом красным. Параллельно с гистологическим исследованием проводилось прижизненное наблюдение регенерации ткани в области лазерных колонок методом кросс-поляризационной оптической когерентной томографии (КП ОКТ). Гистологические исследования зоны лазерного повреждения при режиме 150 мс показали, что непосредственно после повреждения в зоне колонки обнаруживаются деструкция эпителия, полная дезактивация ферментов и признаки слабой (или умеренной) коагуляции коллагена, в то время как полной дезорганизации коллагена не происходит. К 30 дню структура ткани полностью восстанавливается, при этом в эпителии устойчиво обнаруживается признаки паракератоза. Гистологические исследования зоны лазерного повреждения при режиме 250 мс показали, что принципиально сроки его заживления те же, что и при 150 мс, однако степень повреждения ткани и выраженность признаков заживления при режиме 250 мс выражены более значительно. Кроме того, заживление эпителия при режиме 250 мс характеризуется устойчивым развитием не только паракератоза, но и акантоза, что позволяет считать этот режим излучения менее оптимальным. Применение КП ОКТ в исследовании лазерных колонок позволило не только подтвердить некоторые общие закономерности их заживления, доказанные гистологическими исследованиями, но продемонстрировало индивидуальные особенности временной динамики заживления колонок у кроликов в зависимости от глубины колонок, их локализации и возраста животных. В частности, КП ОКТ исследование позволило выделить 3 варианта изменения тканей в зависимости от внешнего вида колонок, при которых наблюдалась различная степень повреждения коллагена: плоское поверхностное пятно молочной белизны (1 тип – слабые изменения коллагена); пузырь или ярко-белое пятно (2 тип – сильные изменения коллагена);

углубление с валиком (3 тип – средние изменения). Параллельное гистологическое и КП ОКТ исследования десны кроликов показали, что КП ОКТ прижизненно отражает наиболее значительные этапы изменения мягких тканей полости рта при нанесении лазерных колонок и их заживлении в течение 30 дней, подтвержденные гистологически, что позволяет его рассматривать в качестве адекватного инструмента неинвазивного мониторинга.

ОБРАЗОВАНИЕ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОВРЕЖДЕНИЙ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ДОЛГОЖИВУЩИХ

РАДИКАЛОВ БЕЛКА

–  –  –

Недавно установлено, что при воздействии ионизирующего излучения в растворах белков и клетках образуются долгоживущие радикалы белка (ДЖРБ) с временем полужизни 20 и более часов. Установлено, что ДЖБР являются источниками длительной генерации в растворе активных форм кислорода. В данной работе исследована способность ДЖРБ продлевать окислительный стресс и вызывать окислительные повреждения в ДНК in vivo. С помощью микроядерного теста исследовано влияние облученного крысиного сывороточного альбумина при внутривенном введении его самцам крыс. Установлено, что введение облученного белка (1 мкг/г) приводит к увеличению количества полихроматофильных эритроцитов, содержащих микроядра, в 2,5 раза по сравнению с контролем. При скармливании в течение суток мышам обезжиренного и обезвоженного творога, облученного в дозе 100 Гр, в красном костном мозге происходит увеличение числа полихроматофильных эритроцитов с микроядрами. Их содержание эквивалентно количеству, образующемуся при тотальном облучении животных в дозе близкой к 0,2 Гр. Этот факт свидетельствует о способности долгоживущих радикалов сохранять свой окислительный потенциал и при переваривании пищи. При одновременном пероральном введении белка и приеме с питьевой водой в качестве природных антиоксидантов 5 мМ растворов инозина, L-триптофана, L-метионина и витамина С наблюдалось снижение величины цитогенетических повреждений. Таким образом, установлено, что

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

облученные белки способны приводить к повреждению структуры ДНК in vivo и показана возможность нейтрализации генотоксических повреждений ДНК с помощью некоторых природных антиоксидантов.

Работа поддержана грантами Российского фонда фундаментальных исследований (10-04-00949-а; 10-04-00800-а) и Президента Российской Федерации для поддержки молодых российских ученых (МК-108.2010.4).

СОЗДАНИЕ КЛЕТОЧНОЙ МОДЕЛИ БЕТА-АМИЛОИДОЗА

НА МАУТНЕРОВСКИХ НЕЙРОНАХ ЗОЛОТОЙ РЫБКИ

–  –  –

В настоящее время проблемы нейродегенеративных заболеваний, в частности, болезнь Альцгеймера, нарушающая высшую нервную деятельность человека, привлекают пристальное внимание из-за своей обостряющейся актуальности в связи с ростом продолжительности жизни, увеличивающей возможность развития этого недуга.

Прогрессирующая потеря памяти, снижение умственных способностей, слабоумие, которое приводит к разрушению личности, не только пагубны для самого пациента, но являются обузой, а иногда и опасны для окружающих, делая проблему социально значимой.

В настоящее время несмотря на большие усилия широкого круга исследователей механизмы болезни Альцгеймера остаются неизвестными. Поэтому отсутствуют адекватные подходы к ее лечению, не разработаны методики ранней диагностики болезни и средства для ее профилактики или хотя бы замедления ее развития. Считается, что в основе болезни Альцгеймера лежит бета-амилоидоз, он является главным патогенным ее фактором. Однако сложность мозга человека и невозможность проведения на нем прямых экспериментов препятствуют расшифровке клеточных механизмов нейродегенеративного процесса, связанного с бета-амилоидозом, затрудняют понять, чем опасен этот пептид и есть ли у него специфическая мишень действия на нервную ткань. Требуются соответствующие модельные системы, которые позволяли бы воспроизводимо индуцировать определенные симптомы болезни системного уровня и одновременно изучать ее клеточные механизмы. Мы впервые использовали для этой цели Маутнеровские нейроны (МН) золотой рыбки, наиболее адекватный объект для подобных исследований. Данные нейроны являются двигательным центром рыб, обеспечивающие латерализацию спонтанного поведения, предпочтение совершать повороты влево или вправо, столь же важным для рыбок, как праворукость или леворукость для человека. Установлено, что в нормальных условиях структурная асимметрия МН взаимосвязана с их функциональной активностью, проявляющейся в моторной асимметрии рыбок, и строго коррелирует с ней (КК=1). Выявлено также, что в интегративную деятельность МН вовлечен актиновый цитоскелет, находящийся под контролем нейротрансмиттерных систем, в частности глутамата и дофамина. Все это послужило основой для разработки клеточной модели бета-амилоидоза на МН. Ее реализация осуществлялась путем аппликации фрагмента бета-амилоида (А25-35) в мозг в область расположения МН. Нами экспериментально были выработаны условия, в которых эффект от аппликации А25-35 максимально проявлялся, а также определены критерии функционального и структурного проявления ее патологического действия. Показано, что у золотых рыбок через воздействие на их МН возможна индукция патологической симптоматики бета-амилоидоза в виде полного рассогласования моторной асимметрии рыбки и структурной асимметрии доминантного и субдоминантного нейронов, т.е. грубого нарушения существующей в норме закономерности. Определены клеточные механизмы амилоидоза, и первичная его мишень – актиновый цитоскелет. Разработана специальная методика стимуляций для профилактики амилоидоза. С ее помощью удается индуцировать адаптивное состояние у рыбок и повышать резистентность их МН. На ее основе выработан подход к терапии амилоидоза дофамином, укрепляющим актиновый цитоскелет МН.

Работа поддержана грантом РФФИ № 09-04-00451а и Федеральной целевой программой «Научные и научнопедагогические кадры инновационной России» Федерального Агентства по науке и инновациям, ГК № 02.740.11.0301.

ЦИТОТОКСИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА РЯДА НИТРОКСИЛЬНЫХ КОМПЛЕКСОВ

ЧЕТЫРЕХВАЛЕНТНОЙ ПЛАТИНЫ

Комлева Н.В.1, Костюк Г.В.1, Балакина И.В.2, Брилкина А.А.2, Сень В.Д.1, Терентьев А.А.1 Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка natalyavkom5@gmail.com Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Н. Новгород

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

Препараты платиновой группы широко используются для химиотерапии опухолей. Три комплекса двухвалентной платины (цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин) применяются в клинике, один комплекс четырехвалентной платины сатраплатин (JM 216) находится на завершающей стадии клинических испытаний в США.

Существенными недостатками комплексов платины как противоопухолевых препаратов является их высокая токсичность. С целью снижения токсичности в платиновые комплексы был введен нитроксильный радикал, который обладает антиоксидантными свойствами. Синтезированные платина(IV)-нитроксильные комплексы (ПНК) имеют общую формулу Pt(IV)(NH3)(R•NH2)X2Cl2, и отличаются структурой аксиальных лигандов X или нитроксильного радикала R.

Цитотоксические свойства цисплатина, сатраплатина (JM216) и полученных ПНК исследовались на клетках HeLa, MCF-7 и H1299 с помощью окрашивания МТТ. Цисплатин и сатраплатин обладают сходной цитотоксичностью. Введение нитроксильного радикала существенно снижает цитотоксичность комплекса Pt(IV). Удлинение аксиальных лигандов позволяет значительно повысить цитотоксичность ПНК и получить комплексы, превосходящие по цитотоксичности цисплатин и JM216.

С использованием метода флуоресцентной микроскопии после окрашивания ДНК красителем DAPI обнаружены сходные изменения в морфологии клеточных ядер при обработке клеток цисплатином и наиболее цитотоксичным из исследованных ПНК (X=H(CH2)4CO): оба комплекса вызывают характерную для апоптоза фрагментацию ядер.

Методом проточной цитофлуориметрии после окрашивания ДНК йодистым пропидием показано, что цисплатин и ПНК (X=H(CH2)4CO) также сходно влияют и на клеточный цикл: обнаружено накопление клеток в S фазе клеточного цикла и в области sub-G1 (погибшие клетки).

Работа поддержана грантом РФФИ 09-03-01187а.

КАЛЬЦИЕВЫЕ ОТВЕТЫ НЕЙРОНОВ ГИППОКАМПА НА АГОНИСТЫ ИОНОТРОПНЫХ ГЛУТАМАТНЫХ РЕЦЕПТОРОВ. ЗАКОНОМЕРНОСТИ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ АМПЛИТУД.

–  –  –

Вариабильность индивидуальных функциональных ответов клеток одного и того же типа не дает возможности распространить количественные результаты, полученные на одиночных клетках на всю популяцию клеток в культуре (в ткани). И наоборот, усредненный ответ популяции клеток не соответствует функциональному ответу индивидуальной клетки. Причины вариабильности изменений концентрации ионов кальция ([Ca2+]i) в отдельных нейронах культуры клеток гиппокампа в ответ на агонисты ионотропных глутаматных рецепторов и закономерности распределения кальциевых ответов по амплитуде являются предметом настоящего исследования.

Изменения [Ca2+]i в ответ на добавление агонистов ионотропных глутаматных рецепторов (NMDA, АМРА и КА) регистрировали по интенсивности флуоресценции двухволнового Са2+-чуствительного зонда Fura-2. Детекция нейрональной активности с помощью системы анализа изображения выявила закономерности вариабильности ответов индивидуальных клеток на агонисты ионотропных глутаматных рецепторов. Амплитуды кальциевых ответов клеток на кратковременную (до 30 сек) аппликацию агонистов глутаматных рецепторов: N-метил-Dаспартата (NMDA), каината (KA), домоевой кислоты (DA), альфа-амино-3-гидрокси-5-метилизоксазол-4пропионовой кислоты (AMPA), фторвиллардиина (FW) равномерно распределены от 0,01 до 0,14 для KAрецепторов, от 0,10 до 0,34 для АМРА-рецепторов и от 0,22 до 0,76 для NMDA-рецепторов соответственно.

По эффективности повышать концентрацию Са2+ лиганды рецепторов располагались в порядке:

NMDAАМРАКА. По мере роста и дифференцировки нейронов в культуре с 1 по 14 DIV амплитуда ответа на все агонисты и у всех клеток возрастает. В культуре встречаются 2-4% нейронов, амплитуды ответов которых превышают средний ответ в 4-5 раз. Эти нейроны, по-видимому, имеют повышенное сродство к агонистам и высокую кооперативность. Амплитуды кальциевого ответа на NMDA, AMPA и KCl в среднем линейно коррелируют друг с другом. Амплитуда кальциевого ответа на агонисты каинатного рецептора не коррелирует с ответами на NMDA, AMPA и KCl. Таким образом, амплитуда кальциевого ответа на агонисты глутаматных рецепторов является характерным параметром индивидуальной клетки в процессе роста и дифференцировки нейронов.

СТАБИЛОГРАФИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОСПРИЯТИЯ ДВИЖЕНИЙ У ЧЕЛОВЕКА

–  –  –

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

Южный Федеральный Университет, Ростов-на-Дону, vladimirkosonogov@yandex.ru Предпосылки исследования: 1) во время исполнения целенаправленных движений возбуждаются вторичные двигательные поля (в том числе и поле 44) коры больших полушарий человека; 2) во время зрительного, слухового, а по некоторым данным и осязательного восприятия движений, исполняемых другими людьми, возбуждаются те же двигательные отделы (в том числе и поле 44), что и при исполнении подобных движений (зеркальные отделы); 3) эти же отделы возбуждаются (сильнее в левом полушарии) и при чтении предложений, в которых описываются движения («кусаю банан», «хватаю ножницы», «нажимаю на педаль пианино»); 4) зеркальные свойства вторичных двигательных полей имеют соматотопическую организацию, в ней есть нейроны, избирательно отвечающие на исполнения и восприятие движений рук, лицевых мышц, рта, причём соседние нейроны отвечают при выполнении схожих движений. Репрезентаций движений туловища и ног здесь меньше, ввиду того, что целенаправленные движения с предметами этими частями тела встречаются реже.

Общетеоретическое предположение: зеркальные вторичные двигательные поля участвуют и в целенаправленных движениях, и при восприятии движений, причем, если исполняемые и воспринимаемые движения сильно отличаются друг от друга, ухудшается и исполнение движений.

Гипотеза исследования: целенаправленное удержание позы ухудшается при восприятии на слух предложений, в которых описываются движения.

Испытуемые: на сегодняшний момент 19 человек (18-26 лет, 13 женщин), условно здоровых, без нарушений опорно-двигательной системы, не занимающихся постоянно спортом.

Оборудование: стабилоанализатор «Стабилан 01-02» (ОКБ «Ритм», г. Таганрог, РФ) Ход опыта: испытуемому предлагалось выполнить пробу «Мишень», в которой при очень высокой чувствительности прибора необходимо удерживать в течение 180 секунд проекцию центра давления своего тела в центре экрана, где изображена обычная стрелковая мишень. Одновременно с этим он слушал текст, воспроизводимый компьютером, в котором каждые десять секунд менялось содержание – описание неподвижных предметов или описание движений человека Испытуемого просили внимательно слушать текст.

Первичные данные: по некоторым стабилографическим показателям были обнаружены достоверные ухудшения выполнения задания при прослушивании текстов, описывающих движения по сравнению с отрезками, во время которых прослушивался текст, описывающий предметы (параметрический Т-критерий Стьюдента для связных выборок при усреднении показателей): разброс по фронтали (t=4,23; p0,001); разброс по сагиттали (t=4,98;

p0,0001); средний разброс (t=5,85; p0,0001); средняя скорость перемещения центра давления (t=4,02; p0,001);

скорость изменения площади статокинезиграммы (t=4,09; p0,001); площадь доверительного эллипса (t=4,63;

p0,0001); индекс скорости (t=3,97; p0,001); оценка движения (t=-3,54; p0,002); длина траектории центра давления по фронтали (t=3,75; p0,002); длина траектории центра давления по сагиттали (t=5,02; p0,0001); длина в зависимости от площади (t=-4,37; p0,001); качество функции равновесии (t=-3,7; p0,002); нормированная площадь векторограммы (t=4,02; p0,001); коэффициент резкого изменения направления движения (t=-3,05;

p0,003); средняя линейная скорость (t=4,03; p0,001); мощность векторограммы (t=3,68; p0,001).

Предварительные выводы: гипотеза оправдывается, необходимо подключить более сложный статистический аппарат.

–  –  –

Целью работы было изучение динамики изменения параметров свободно-радикального окисления: уровня индуцированной хемилюминесценции, содержания продуктов перекисного окисления липидов – диеновых конъюгатов и малонового диальдегида, активности антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы и каталазы, содержания карбонильных производных, характеризующих степень окислительной модификации белков, в организме экспериментальных животных на протяжении 21 суток наблюдения. В течение всего периода исследования проводилась регистрация фазовых флуктуаций акустического импеданса (F-индекса), представляющая собой способ мониторинга и интегральной оценки состояния внешней среды, по методике, разработанной Черновым В.В. в ИПФ РАН (Н. Новгород, 1995) с целью определения корреляционных взаимосвязей между исследованными параметрами. Для установления различий одновременно между семью анализируемыми выборками были использованы ранговый анализ вариаций по Краскелу-Уоллису и медианный тест. Степень согласованно

<

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

сти изменений исследуемых признаков определялась по ранговому коэффициенту корреляции Спирмена (согласованность изменений считалась значимой при p 0.05).

В ходе эксперимента было зафиксировано событие, сопровождавшееся значительным изменением состояния внешней среды, регистрируемого по снижению значений F-индекса, достижению им критической точки минимума и последовавшим восстановлением значений до исходного уровня. В печени здоровых животных в ходе эксперимента установлены статистически значимые изменения следующих параметров, характеризующих процессы свободно-радикального окисления – продуктов перекисного окисления липидов диеновых конъюгатов и малонового диальдегида, максимальной интенсивности хемилюминесценции и общей антиоксидантной активности и на 12 день отмечена максимальная активность фермента каталазы. В плазме крови и эритроцитах интактных животных в ходе эксперимента нелинейно менялись следующие параметры, характеризующие процессы свободно-радикального окисления: содержание диеновых конъюгатов и малонового диальдегида, активность антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы и каталазы, а также содержание продуктов окислительной модификации белков. На 12 день в плазме крови отмечено максимальное значение хемилюминесцентного свечения. Изменение исследованных параметров свободно-радикального окисления происходит согласованно с изменениями F-индекса фазовых флуктуаций, характеризующих изменения во внешней среде, что подтверждено с помощью корреляционного анализа.

МЕТАЛЛОПОРФИРАЗИНОВЫЕ КОМПЛЕКСЫ ИТТЕРБИЯ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРЫ

Леканова Н.Ю.1, Лермонтова С.А.1,2, Крутова И.В.1, Ширманова М.В.3 Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Н.Новгород Институт металлоорганической химии им. Г.А. Разуваева РАН Нижегородская государственная медицинская академия, Н.Новгород, nat-lekanova@yandex.ru Фотодинамическая терапия (ФДТ) является сравнительно новым методом лечения онкологических заболеваний, но уже сегодня клинические исследования показывают ее преимущества перед традиционными методами в лечении ряда опухолей. Для ФДТ используются вещества - фотосенсибилизаторы (ФС), которые наряду со способностью селективно накапливаться в патологических тканях, при облучении способны продуцировать синглетный кислород, обладающий цитотоксическим действием. К настоящему времени, не найдено идеальных ФС, удовлетворяющих всем требованиям онкологов (низкая темновая и световая токсичность, высокая селективность накопления в опухолях и быстрое выведение из нормальных тканей, поглощение в «оптическом окне» прозрачности биологических тканей, хорошая растворимость, высокий квантовый выход продукции синглетного кислорода и т.д.) и поэтому существует потребность в разработке новых ФС.

Целью данной работы являлась оценка флуоресцентных и функциональных свойств нового потенциального фотосенсибилизатора на основе металлопорфиразиновых комплексов.

В ходе работы исследована группа новосинтезированных соединений – порфиразиновых комплексов иттербия.

Были получены стабильные биосовместимые водорастворимые формы на основе тетрацианотетрафенилпорфиразинового комплекса иттербия и изучены их оптические свойства в водном растворе и в биоподобных жидкостях. Проведены исследования на клеточных культурах методом конфокальной лазерной сканирующей микроскопии. На завершающем этапе исследована селективность накопления потенциальных фотосенсибилизаторов в экспериментальных опухолях.

Показано, что водорастворимые формы порфиразина иттербия обладают высоким коэффициентом поглощения и сильной люминесценцией в области «окна прозрачности» биотканей. Значительное возрастание интенсивности флуоресценции комплекса наблюдалось в сыворотке крови и растворе яичного альбумина. Предположительно, данное повышение интенсивности флуоресценции может быть обусловлено взаимодействием комплекса с белками.

Эксперименты in vitro на клеточных культурах показали проникновение и аккумуляцию комплекса в опухолевых клетках. Внутривенное введение комплекса лабораторным животным также приводило к его накоплению в опухоли, однако показано значительное накопление порфиразина иттербия и в других органах. Повышение специфичности, как предполагается, может быть достигнуто путем подбора оптимальной гидрофильной формы данного соединения.

Таким образом, металлопорфиразиновые комплексы иттербия по своим оптическим свойствам и особенностям взаимодействия с биологическими объектами представляют интерес в качестве потенциальных фотосенсибилизаторов для фотодинамической терапии и/или флуоресцентных маркеров.

Работа выполнена при финансовой поддержке Федерального агентства по науке и инновациям (ГК №02.740.11.0086) и РФФИ (проекты №09-02-97065, 10-03-90006).

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

КЛЕТОЧНАЯ ТЕРАПИЯ ХРОНИЧЕСКИХ ОБЛИТЕРИРУЮЩИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ АРТЕРИЙ НИЖНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ: МЫШЕЧНАЯ РЕГЕНЕРАЦИЯ ПРИ АУТОЛОГИЧНОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ

СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

–  –  –

Казанский государственный медицинский университет, Казань, mikhail.mavlikeev@yahoo.com В последние годы большее значение приобретают хронические облитерирующие заболевания артерий нижних конечностей (ХОЗАНК). Доклиническими исследованиями доказана эффективность клеточной терапии ХОЗАНК. Целью нашего исследования было изучение терапии ХОЗАНК аутологичными стволовыми клетками периферической крови (СКПК) и выявление лежащих в её основе морфофункциональных механизмов. Исследование проведено в 2008-2009 гг. на базе Республиканской Клинической Больницы Минздрава Республики Татарстан.

Материалы и методы. Парафиновые срезы биоптатов икроножной мышцы пораженной конечности 30 больных ХОЗАНК до начала терапии и через 3 месяца после внутримышечного введения мобилизованных аутологичных СКПК окрашивали иммуногистохимически с антителами к маркерам эндотелия (CD31, CD34, фактор фон Виллебрандта), а также с антителами к миогенину – маркеру миосателлитов. Далее производили морфометрический анализ образцов, подсчитывали число мышечных волокон и капилляров и определяли их соотношение. Обработку данных производили с применением статистического графического пакета Statistica 8.

Результаты исследования. Результаты иммуногистохимического окрашивания показали рост соотношения «число капилляров/число мышечных волокон» на 25% (p0,001). В биоптатах мышечной ткани до введения стволовых клеток мы наблюдали единичные миогенин-позитивные клетки, их число увеличивалось через 3 месяца после трансплантации, появлялись клетки с миогенин-позитивными ядрами, что является признаком поздних стадий дифференцировки миосателлитов. Также мы наблюдали слияние клеток с образованием миотуб и новых мышечных волокон.

Вывод: аутотрансплантация СК ПК ведет к улучшению васкуляризации ишемизированной конечности путем неоангиогенеза, активации миосателлитов и формированию новых мышечных волокон, что способствует восстановлению функции ишемизированной конечности.

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ОРГАНИЧЕСКИХ СОЛЕЙ

АЛЕНДРОНОВОЙ КИСЛОТЫ, КАК ПРОЛЕКАРСТВА ИНГИБИТОРОВ

–  –  –

Казанский государственный университет, Казань, Katrin537@yandex.ru Изучение механизмов развития и прогрессирования такого заболевания, как акне, представляет актуальную задачу в современной молекулярной фармакологии, так как открывает перспективу новых методов предотвращения развитие хронической формы заболевания. Недавно была установлена зависимость между скоростью окисления сквалена в клетках кожи и индукции воспаления сальных желех (комедогенеза) с последующим развитием акне. Метаболиты пути от сквалена до десмохолестерина обеспечивают нормальный уровень холестерина как индуктора пролиферации клеток. Экзогенные стероиды приводят накоплению сквалена и его окисленных форм, что привлекает Propionibacterium acne.

В опытах исследовалось действие алендроната натрия, который является бифосфонатом, на синтез эргостерола у красных дрожжей вида Rhodotorula glutinis, как первичной модели для выявления молекулярной мишени лекарственного препарата. Было показано, что алендронат натрия приводит к подавлению роста красных дрожжей, а также его синтетические соли снижают скорость роста дрожжей по сравнению с контролем. С целью определения образования продуктов реакции в присутствии алендроната натрия провели опыт, в котором было показано, что скваленэпоксид образуется после 20 минут от начала реакции, а также проявляется сквален, который не потребовался в реакции. При этом алендронат натрия приводил к появлению метаболитов, отсутствующих в контроле. Также было изучено влияние солей алендроновой кислоты на пигментообразование Rhodotorula glutinis.

Соли алендроновой кислоты в дозах 10-3 М ингибируют синтез астаксантина, главного пигмента красных дрожжей. С помощью протеомный анализ белковых фракций клеток дрожжей, выросших на среде с алендронатом натрия выявил резкое снижение белков в области 10-80 кДа. Возможно, такое сильное воздействие алендроната натрия выражено ингибированием на уровне трансляции или транскрипции.

Таким образом, алендронат натрия и его органические соли ингибируют синтез астаксантина путем подавления, по-видимому, синтеза холестерина на уровне сквалена, а также подавляют рост путем регуляции сквален эпокБИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА сидазы на уровне трансляции или транскрипции. Поэтому алендронат натрия целесообразно использовать в качестве одного из действующих веществ препарата для лечения акне.

МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ АГМАТИНА НА ПОТЕНЦИАЛ-ЗАВИСИМЫЕ Сa2+-ТОКИ L-ТИПА В ИЗОЛИРОВАННЫХ КАРДИОМИОЦИТАХ КРЫС.

Мальцев А.В.1,2, Ненов М.Н.1, Пименов О.Ю.1, Кокоз Ю.М.1 Институт Теоретической и Экспериментальной Биофизики, ИТЭБ РАН, Пущино, goicr@rambler.ru Нижегородский Государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Н. Новгород.

Агматин – основной амин, образуемый при декарбоксилировании L-аргинина ферментом аргининдекарбоксилазой (ADC). Было показано, что как агматин, так и ADC присутствуют, в мозге, сердце, мышечной ткани и плазме крови млекопитающих. Известно, что агматин оказывает свои эффекты, действуя как эндогенный агонист имидазолиновых рецепторов (IRs) и 2-адренорецепторов (2-ARs). Тем не менее, данные по функциональной активности агматина на 2-ARs являются противоречивыми, например, в некоторых экспериментах in vitro он не активирует этот тип рецепторов. Установлено, что агматин может выполнять важные нейромодуляторные функции в ЦНС, а также оказывать влияние на сердечнососудистую систему (ССС). Введение агматина крысам снижает артериальное давление дозо-зависимым образом, подавляет пролиферацию гладкомышечных клеток сосудов и стимулирует секрецию натрийуретического пептида в кардиомиоцитах. Так как агматин не может проникнуть через гематоэнцефалический барьер, было предположено, что периферический сосудорасширяющий ответ обуславливался либо снижением симпатической нервной активности, либо высвобождением оксида азота (NO). Однако в других работах установлено, что агматин может ингибировать NO-синтазу. Также, было показано, что агматин дозо-зависимо ингибирует Ca2+-токи в желудочковых кардиомиоцитах и неонатальной культуре нейронов гиппокампа, но механизм его действия в обоих случаях не выяснен.

Цель данной работы: исследовать механизм действия агматина на амплитуду потенциал-зависимых Са2+-токов Lтипа в изолированных кардиомиоцитах крыс Sprague Dawley. Для этого, с использованием ингибиторного анализа, мы попытались определить тип рецепторов, через который реализуется эффект агматина, и связан ли он с NO и/или другими сигнальными молекулами и ферментами. Нами было показано, что агматин дозо-зависимо подавлял амплитуду Са2+-тока L-типа. Эффект агматина не снимался в присутствии иохимбина (селективный антагонист 2-ARs), и в присутствии 7NI (ингибитор NO-синтазы). Это свидетельствует о том, что агматин оказывает свой эффект на Ca2+-токи через процессы, не сопряжённые с 2-ARs и NO.

Далее, мы решили проверить, связан ли эффект агматина, с его способностью взаимодействовать с IRs. В наших экспериментах, ингибирование Ca2+-токов агматином в присутствии идазоксана (антагонист IRs) достоверно снижалось, что говорит об опосредованности действия агматина через IRs. Согласно литературным данным, при стимуляции IRs отмечалось повышение концентрации диацилглицерола (ДАГ) внутри клетки. Как известно, ДАГ является вторичным мессенджером, который может активировать классические и новые изоформы протеинкиназы C (PKC). Чтобы проверить является ли PKC вовлечённой в возможный механизм трансдукции сигнала IRs, нами использовался неселективный блокатор PKC-изоформ – кальфостин С. В присутствие кальфостина С эффект агматина на амплитуду Са2+ тока L-типа также был достоверно ниже. Полученные результаты дают основания полагать, что агматин ингибирует Са2+ токи L-типа через IRs и его эффект связан с активацией PKC.

Полученные данные могут быть полезны для создания и усовершенствования лекарственных препаратов используемых при лечении сердечно-сосудистых заболеваний

ИНГИБИРОВАНИЕ ЗАЩИТНЫХ РЕАКЦИЙ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ В СИСТЕМЕ С

КВАНТОВЫМИ ТОЧКАМИ И НАНОПОРОШКОМ Er/Yb

–  –  –

Нейтрофильные гранулоциты являются одним из ключевых факторов неспецифической резистентности организма. Киллинговая способность нейтрофилов реализуется благодаря кислородзависимым и кислороднезависимым механизмам. Кислородзависимые защитные механизмы реализуются при помощи респираторного взрыва

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

нейтрофильных гранулоцитов, который обычно сопутствует фагоцитозу, а также благодаря активности миелопероксидазной системы. Кислороднезависимые защитные механизмы реализуются при помощи лактоферрина, лизоцима, а также различных катионных белков. В частности, в представленной работе состояние кислороднезависимой биоцидности нейтрофильных гранулоцитов оценивали по содержанию лизосомально-катионных белков (ЛКБ), которые определяли с помощью лизосомально-катионного теста (ЛКТ), предложенного В.Е. Пигаревским. Оксидативную активность нейтрофилов оценивали спектрофотометрическим методом по изменению окраски красителя ТМБ в системе с миелопероксидазой нейтрофилов.

Нейтрофильные гранулоциты выделяли из крови здоровых доноров на двойном градиенте фиколла-урографина.

Квантовые точки CdSe/ZnS, покрытые меркаптопропионовой кислотой (МПК), (CdSe/CdZnS)ZnS-polyT, CdSeCdSZnS/polyT/SiO2-NH2 (НТИЦ «Нанотех-Дубна», г. Дмитров), взятые в конечной концентрации 0,1 мг/мл, и нанопорошок Er/Yb в конечных концентрациях 1·10-3 мМ и 8,25·10 -5 мМ инкубировали с клетками (2 млн.кл/мл) в течение 60 мин при 37 0С. Далее проводили ЛКТ-тест и оценивали активность миелопероксидазы нейтроифлов.

Цитохимическое исследование лизосомально-катионных белков показало, что после инкубации c частицами Er/Yb и квантовыми точками по сравнению с контролем наблюдается снижение среднего цитохимического коэффициента (СЦК) от 1,37 ± 0,7 до 0,85 ± 0,6 (р0,05) для концентрации Er/Yb 8,25·10 -5 мМ, 0,83 ± 0,6 (р0,05) для концентрации Er/Yb 1·10-3 мМ, 0,89±0,16 (р0,05) для концентрации CdSe/ZnS-МПК 0,1 мг/мл, 0,88±0,04 (р0,05) для концентрации (CdSe/CdZnS)ZnS-polyT 0,1 мг/мл и 0,98±0,06 (р0,05) для концентрации CdSeCdSZnS/polyT/SiO2-NH2 0,1 мг/мл.

Также было выявлено снижение активности миелопероксидазы нейтрофилов в системе с квантовыми точками и нанопорошком Er/Yb. Величина оптической плотности для контрольных образцов составила 0,023±0,008, а после воздействия нанопорошка (8,25·10 -5 мМ и 1·10-3 мМ) – 0,017±0,015 и 0,013±0,01 соответственно и квантовых точек CdSe/ZnS-МПК, (CdSe/CdZnS)ZnS-polyT – 0,014±0,009 и 0,019±0,013 соответственно.

Таким образом, проведенные исследования позволили выявить негативное воздействие наноматериалов на ферментные системы нейтрофильных гранулоцитов, что повлекло за собой ингибирование оксидативных и неоксидативных защитных реакций клеток в системе с квантовыми точками и нанопорошком Er/Yb.

Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ 09-04-97068-р_поволжье_а.

–  –  –

Выявлено, что измененный в результате патологического процесса метаболизм может стать фактором, индуцирующим нестабильность генома у больных. Нестабильность генома выявлена при инфекционной патологии (вирусные, инфекционные, паразитарные заболевания), болезнях сердечно-сосудистой системы, нарушениях иммунного статуса, детских церебральных параличах, патологии новорожденных, травмах и т. д. Спектр соматической патологии совместимый с нестабильностью генома в настоящее время расширяется.

Нестабильность генома (НГ)- это широко распространенное в популяции человека явление. Эволюционно детерминированное, оно представляет собой адаптационно-компенсаторное свойство живой материи. НГ есть постоянное изменение структуры хромосомы, ее отдельного локуса или группы локусов, возникающее спонтанно или под действием некоторых мутагенов. Признаком нестабильности является сохранение потенциальной возможности таких изменений в ряду клеточных поколений. Фенотипически феномен регистрируется появлением у больных (или вакцинированных), наряду со специфической симптоматикой, мутационных (генных, хромосомных и геномных) изменений в клетках. Для медицины актуальность этой проблемы определяется именно взаимосвязью НГ с большинством заболеваний. Это с одной стороны позволяет рассматривать нестабильность генома как типовой патологический процесс в разнообразной дизрегуляционной патологии, с другой наметить общие принципы коррекции этого феномена на основе концепции фармакологической защиты генома.

Целью данной работы является исследование нестабильности генома у детей с вирусными и бактериальными инфекциями (с ОРВИ и кишечными инфекциями).

В работы были поставлены следующие задачи: определить уровень эритроцитов с микроядрами периферической крови пациентов с ОРВИ (средней степени), ОРВИ+бронхит, ОКИ (острые кишечные инфекции) и сравнить их с данными показателями здоровых доноров; провести сравнительную оценку нестабильности генома (по степени отличия уровня эритроцитов с микроядрами) у пациентов с ОРВИ (ср. тяж.), ОРВИ + бронхит и ОКИ.

Сравнительный анализ уровней эритроцитов с микроядрами в периферической крови детей группы сравнения и больных детей проводили по методике Ильинских с соавт. По 10 мазков от каждой группы пациентов фиксиро

<

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

вали в этаноле, окрашивали по Гимзе. Просматривали более 20000 эритроцитов на каждом мазке крови в световой микроскоп с иммерсией при общем увеличении 900х и определяли количество эритроцитов с микроядрами.

На основе полученных результатов были сделаны следующие выводы: уровни эритроцитов с микроядрами в периферической крови пациентов с ОРВИ (ср. тяж.), ОРВИ+бронхит и с ОКИ достоверно превышает уровень эритроцитов с микроядрами у здоровых доноров.При сравнении уровней эритроцитов с микроядрами в периферической крови между тремя группами больных достоверные различия наблюдались между группами пациентов с ОРВИ (ср. тяж.) и ОРВИ+бронхит, причем уровень эритроцитов с микроядрами при ОРВИ (ср. тяж.) достоверно выше, чем при ОРВИ+бронхит. Достоверных отличий по этим же показателям между группами ОРВИ+бронхит-ОКИ и ОРВИ (ср. тяж.) - ОКИ не наблюдалось.

ИССЛЕДОВАНИЕ КЛАСТОГЕННЫХ И АНТИКЛАССТОГЕННЫХ СВОЙСТВ ИНТЕРЛЕЙКИНА-2

–  –  –

В последнее время все чаще возникает необходимость защиты генетических структур лиц, получающих лечение незаменимыми лекарствами с мутагенной активностью. На сегодняшний день наиболее интересными в плане антимутагенного действия являются цитокины, в частности интерлейкин. Он играет важнейшую роль в процессах иммунного ответа и апоптоза. Таким образом изучение антимутагенных свойств интерлейкина привлекает повышенное внимание. Важным является его проверка на эукариотических тест-системах, а также выбор наиболее оптимальных схем применения.

Целью данной работы является исследование кластогенных и антикластогенных свойств интелейкина-2.

В этой работе были поставлены следующие задачи:

Определение кластогенной активности интерлейкина-2 на эритроцитах периферической крови мышей в 1.

хроническом опыте.

Определение антикластогенной активности интерлейкина-2 на эритроцитах периферической крови 2.

мышей в хроническом опыте при профилактической, совместной и последующей обработке.

Определение антикластогенной активности разных концентраций (0,4 мг/кг, 1,0 мг/кг) интерлейкина-2 3.

на эритроцитах периферической крови мышей в хроническом опыте.

Определение антикластогенной активности интерлейкина-2 в зависимости от времени забора крови на 4.

эритроцитах периферической крови мышей в хроническом опыте.

В каждом варианте изучалась группа животных, состоящая из трех мышей. Опыт проводился в трех повторностях в течение 10 дней. Забор крови осуществлялся на 11, 12, 13 и 17 сутки после первого введения. Исследовалось не менее 20000 эритроцитов. Животные содержались в виварии Центральной научно-исследовательской лаборатории Казанского Государственного Медицинского Университета. В качестве корма для животных использовали сырые семена подсолнечника, геркулес.

В качестве скрининг-теста для определения кластогенного и антикластогенного действия был использован микроядерный анализ.

Выводы:

Интерлейкин в хроническом опыте на эритроцитах периферической крови мышей не обладает 1.

кластогенным действием в исследуемых концентрациях 0,4 и 1,0 мг/кг.

Интерлейкин в хроническом опыте на эритроцитах периферической крови мышей проявил 2.

антикластогенную активность при всех способах обработки.

Интерлейкин в хроническом опыте на эритроцитах периферической крови мышей показал выраженную 3.

антикластогенную активность в конценрации 1,0 мг/кг по сравнению с концентрацией 0,4 мг/кг.

Интерлейкин в хроническом опыте на эритроцитах периферической крови мышей показал выраженную 4.

антикластогенную активность на 2 и 7 сутки после последнего введения в концентрации 0,4 мг/кг, а при концентрации1,0 мг/кг происходило линейное уменьшение эритроцитов с микроядрами в зависимости от времени забора крови.

ВОЗМОЖНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДА КОНФОКАЛЬНОЙ МИКРОСКОПИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИЗМЕНЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО КАЛЬЦИЯ ПРИ ГЕНЕРАЦИИ ПОТЕНЦИАЛОВ ВОЗБУЖДЕНИЯ У ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ

–  –  –

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Н. Новгород, orlova_la@bk.ru В ответ на внешнее раздражение растения способны генерировать распространяющиеся электрические сигналы – потенциалы возбуждения, которые представлены у растений потенциалом действия (ПД) и вариабельным потенциалом (ВП). Считается, что в процессе генерации потенциалов возбуждения у высшего растения принимают участие ионы Ca2+, Cl- и K+, а также электрогенный насос – Н+-АТФаза плазматических мембран, при этом на стадии деполяризации активность Н+-АТФазы угнетается за счёт входящего в цитоплазму потока ионов Ca2+, а на стадии реполяризации восстанавливается в виду возвращения уровня внутриклеточного кальция к исходным значениям. Целью данной работы стала разработка метода изучения изменения концентрации внутриклеточного кальция в процессе генерации потенциалов возбуждения у высшего растения. Объектом исследования служили 2-х недельные проростки пшеницы Arabidopsis thaliana L. и 2-х недельные проростки тыквы Cucurbita pepo L.

Для регистрации изменения концентрации внутриклеточного кальция применяли флуоресцентный зонд FluoAM. На первом этапе был проверен способ загрузки зонда Fluo-3/AM в интактные корни пшеницы. С целью предотвращения расщепления АМ-компонента эстеразами апопласта корни проростка, погруженные в раствор зонда, помещали в темноту при температуре 4оС на 2 часа, затем при комнатной температуре корни отмывали от зонда и помещали в стандартный раствор, при этом осуществляли четырёх-пяти кратную его замену с периодичностью 20 минут. Регистрацию флуоресценции зонда осуществляли с помощью метода конфокальной микроскопии. Ячейку с корнями в стандартном растворе помещали на столик микроскопа. Флуоресценцию регистрировали по двум каналам: первый канал регистрации (500-550нм) соответствовал флуоресценции зонда Fluo-3, второй канал (650-710нм) – автофлуоресценции хлоропластов. Были получены изображения корневого апекса, спектральный анализ которых выявил наличие максимума интенсивности флуоресценции, который соответствует максимуму флуоресценции зонда.

На следующем этапе по аналогичной схеме была произведена загрузка зонда Fluo-3/AM в стебель проростка тыквы. После 2-4 часового пребывания в условиях пониженной температуры, у проростка не было зарегистрировано флуоресценции в области максимума флуоресценции Fluo-3. После пребывания в условиях пониженной температуры в течение большего промежутка времени (14-16 часов)был зарегистрирован максимум флуоресценции, который соответствует максимуму флуоресценции зонда fluo-3.

На следующем этапе осуществляли регистрацию интенсивности флуоресценции зонда с одновременной регистрацией электрической активности с помощью хлорсеребряных макроэлектродов. Предварительно получены данные о том, что при генерации импульса происходит регистрируемое увеличение интенсивности флуоресценции на фазе деполяризации, что может быть обусловлено возрастанием концентрации внутриклеточного кальция.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант 09-04-97085).

–  –  –

Цель исследования. Изучение безопастности лабораторного препарата hrHSP70 и его эффективности при внутривенном введении крысам с моделируемым грамположительным и грамотрицательным сепсисом.

Материалы и методы. Эксперименты выполнены на бодрствующих SPF-самцах крыс Sprague-Dawley массой 300-350 г. За 24 часа до эксперимента животным под наркозом (хлоралгидрат, i.p., 400 мг/кг) имплантировали катетеры в сонную артерию (измерение гемодинамики и забор крови) и яремную вену (введение веществ).

Грам(-) сепсис моделировали с помощью липополисахарида (ЛПС) из E.coli (i.v., 2 мг/кг), грам (+) с помощью липотейхоевой кислоты (ЛТК) из S.aureus (i.v., 3 мг/кг). Эффективность hrHSP70 тестировали при профилактическом и терапевтическом i.v. введении за 10 мин до или после ЛПС (ЛТК). Препарат вводили в дозах 266 и 133 мкг/кг. Регистрировали параметры гемодинамики непрерывно в течение 5 часов, показатели гемостаза и биохимии крови проводили до введения веществ, через 20 мин и через 5 ч после инициации сепсиса. Выживаемость животных наблюдали в течение 72 ч. Для изучения собственной физиологической активности на данные параметры hrHSP70 вводили i.v. здоровым животным (без сепсиса) в дозе 266 мкг/кг. Для исследования токсичности препарат i.v. вводили мышам CD в дозе 26,6 мг/кг. Через 2 недели проводили некропсию с макроскопическим осмотром внутренних органов и тотальным забором крови для биохимического анализа.

Результаты. Предварительное введение hrHSP70, в отличие от терапевтического, оказывает выраженное защитное действие при моделировании как грам(-), так и грам(+) сепсиса у крыс. Снижение дозы в 2 раза приводит к снижению протективного эффекта препарата. При этом сам препарат hrHSP70 не оказывает заметного влияния на

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

изучаемые физиологические параметры. Даже в достаточно высоких дозах (в 100 раз больше эффективной при сепсисе) препарат не оказывает токсического влияния на организм животного.

Выводы. По результатам исследования, лабораторный препарат hrHSP70 может быть рекомендован для проведения доклинических испытаний как новое эффективное средство профилактики сепсиса. Таким образом, дальнейшее изучение hrHSP70 представляет большой интерес, как для фундаментальной науки, так и для клинической медицины.

ДЕТЕКЦИЯ СПАЙКОВ В ЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КУЛЬТУРЫ НЕЙРОНОВ.

Пимашкин А.С., Корягина Е.А., Казанцев В.Б., Мухина И.В.

Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Н.Новгород, aspimashkin@mail.ru;



Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 |
Похожие работы:

«Функциональное программирование 1 Введение Программы на традиционных языках программирования, таких как Си, Паскаль, Java и т.п. состоят их последовательности модификаций значений некоторого набора переменных, который называется состоянием. Если не рассматрива...»

«УТВЕРЖДЕНО приказом Председателя Правления НКО ЗАО НРД от 6 мая 2013 г. № 87 Изменения и дополнения в Порядок взаимодействия Депозитария и Депонентов при реализации Условий осуществления депозитарной деятельности Небанковской кредит...»

«ТКППМ 258939: Вниманию руководителей агентств и субагентов! Информируем Вас, что внесены изменения в Инструкцию по оформлению EMD НСАВ-ТКП (код 50) на неустойку/плату, установленную перевозчиком при изменении условий перевозки, при проведении операции 7О. Изменения касаются формата запроса для бронирования СВС элемента. СВС эл...»

«RUS Инструкция по эксплуатации Конвекционно-паровая печь Basic Steam Easy+ + BS 5230 / 116.812 + BS 6110 / 116.816 + BS 10110 / 116.820 Comfort Steam CS 5230 / 116.412 CS 4110 / 116.414 CS 6110 / 116.416 V1/0911 -1Инструкцию по эксплуатации хранить в доступном месте!1. Общие с...»

«университета водных ЖУРНАЛ коммуникаций СУДОСТРОЕНИЕ И СУДОРЕМОНТ УДК 629.12.066 В. М. Приходько, канд. техн. наук, доцент, СПГУВК; М. Л. Ивлев, канд. техн. наук, филиал "Севмаш ВТУЗ" СПГМТУ; И. В. Приходько, аспирант, СПГУВК ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ЭЛЕКТРОПОТРЕБЛЕНИЯ СУДОРЕМОНТ...»

«В статье Александра Воронина из Российского общества по изучению Атлантиды подробнейшим образом рассматривается жизнь и деятельность известного ученогоатлонтолога Отто Мука. Работа этого выдающегося исс...»

«1 1. Цель освоения дисциплины Целью освоения дисциплины "Геоинформационные системы в строительстве" является формирование у обучающихся бакалавров: – естественнонаучного (материалистического) мировоззрения;– понимания современных тенденций развития научно-производственных знаний, в частност...»

«Достижения Государственного автономного учреждения социального обслуживания "Комплексный центр социального обслуживания населения "Балкыш" Министерства труда, занятости и социальной защиты Республики Татарстан в Чистопольском м...»

«1. Установка программы для заполнения декларации о доходах физических лиц по форме 3-НДФЛ 1.1. В первую очередь, запишите на свой компьютер программу "Декларация NNNN", где NNNN – год декларирования. Например, для заполнения декларации за 2011 год, нужна программа "Декларация 2011", для заполнения де...»

«Агрессивность. ОБЗЫВАЛКИ (Кряжева Н.Л.) Цель: снять вербальную агрессию, помочь детям выплеснуть гнев в приемлемой форме. Скажите детям следующее: "Ребята, передавая мяч по кругу, давайте называть друг друга разными необидными словами (заранее обговаривается условие, какими обзывалками можно пользоваться. Это...»

«Letters@public.ru 7 (495) 980 06 86 Интернет-библиотека СМИ Коррупция в зеркале российских СМИ: от серьезного до курьезного. Борьба с непобедимой российской коррупцией стала наряду с модернизацией одним из главных приоритетов руководства РФ. Первый план по противоде...»

«№1 2013 ISSN 2311-1313 Управление в современных системах УДК 339.004 ББК 64.2 ОЦЕНКА СОСТОЯНИЯ МУНИЦИПАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ "ЧЕЛЯБИНСКИЙ ГОРОДСКОЙ ОКРУГ" Е.С. Микула, магистрант кафедры "ГМУ", ФГБОУ ВПО "Челябинский государственный университет"...»

«Аналитический обзор исполнения доходной части государственного бюджета за январь-ноябрь месяцы 2015 года. За январь-ноябрь месяцы 2015 года Государственной налоговой службой при Правительстве Кыргызской Республики...»

«ГОСТ 790-89 МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ МЫЛО х о з я й с т в е н н о е т в е р д о е И МЫЛО ТУАЛЕТНОЕ ПРАВИЛА ПРИЕМКИ И МЕТОДИКИ ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЙ Издание официальное Москва Стандартинформ Поправка к ГОСТ 790—89 Мыло хозяйственное твердое и мыло туалет­ ное. Правила приемки и методики выполнения измерений (см. Изменение № 1, М...»

«№ 1 (3), 2016 ТЕХНІЧНІ НАУКИ ТА ТЕХНОЛОГІЇ TECHNICAL SCIENCES AND TECHNOLOGIES УДК 621.923.42 Геннадий Веремей АНАЛИЗ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОЦЕССА ВОССТАНОВЛЕНИЯ СЁДЕЛ КЛАПАНОВ В АВТОРЕМОНТНОМ ПРОИЗВОДСТВЕ Геннадій Веремей АНАЛІЗ ЕФЕКТИВНОСТ...»

«Слово о науке Гумилев Л. Н. В ГЛУБОКОЙ ДРЕВНОСТИ Когда наука была в зачатке, люди представляли мир как собрание недвижных предметов: звезд, гор, морей, а если им приходилось наблюдать движение, смену дня и ночи, произрастание трав или старение своих близких, то они считали эти...»

«МАШИНОСТРОЕНИЕ примерно на 10% тверже алмаза, при этом он всего на 0,3% плотнее его. Новый углеродный материал царапает обычные алмазы. Это означает, что он располагается на шкале Мооса6 выше алмаза – непревзойденного...»

«"УТВЕРЖДЕНО" Решением Правления ОАО АКБ "ИТ БАНК" Протокол от " " 2015 г. Председатель Правления О.А. Сильнягин ТАРИФЫ на обслуживание банковских счетов для расчётов с использованием банковских карт ОАО АКБ "ИТ Банк" Действуют с "03"...»

«Руководство по эксплуатации yamaha xtz660 tenere 25-03-2016 1 Опрокидывание является иллюзорно пылящей амбразурой. Портеры номинируются за адаптивность, вслед за этим завидно не изрубленная аудиокнига пом...»

«СТАВКА ВЕРХОВНОГО ГЛАВНОКОМАНДОВАНИЯ: СТРУКТУРА, ФУНКЦИИ И МЕТОДЫ СТРАТЕГИЧЕСКОГО РУКОВОДСТВА ВООРУЖЕННЫМИ СИЛАМИ СССР В годы войны важнейшее место в единой системе государственного и военного управления Советского Союза занимали вопросы стратегического руководства вооруженными силами. В...»

«В.Я.Гельман, кандидат политических наук, Европейский университет в Санкт-Петербурге В поисках автономии: реформа местного самоуправления в городах России1 О дним из знаковых явлений в российской политике 90-х годов стало провозглашение автономии местн...»

«Е.Д. ГОПЧЕНКО, А.В. ГУШЛЯ ГИДРОЛОГИЯ С.ОСНОВАМИ Допущено Министерством высшего и среднего специального образования СССР в качестве учебника для студентов вузов, обучающихся по специальности "Метеорология" ЛЕНИНГРАД ГИДР0МЕТЕ0ИЗДАТ 1989 УДК [556+ 631.6] (075.8) Рецензенты: Ленинградский гидрометеорологический институ...»

«мелководью или стояли, посматривая по сторонам, после чего одна за другой разлетелись. Литература Березовиков Н.Н. 2006. Клептопаразитизм хохотуньи Larus cachinnans в колониях большого баклана Phalacrocorax carbo на озере Алаколь // Рус. орнитол. журн. 15 (328): 805-806. Долгушин И.А. 1960. Птицы Казахстана. Алма-Ата, 1: 1-470...»

«Секция 4 ЭНЕРГЕТИКА: ЭФФЕКТИВНОСТЬ, НАДЕЖНОСТЬ, БЕЗОПАСНОСТЬ Из рисунка 2 видно, что лучшие свойства при извлечении солей жёсткости из модельного раствора наблюдаются у фракции менее 0,1 мм. У всех представленных образцов цеолитов показаны хорошие ионообменные свойства уже при малом времен...»

«Инструкция по монтажу и настройке theRonda P360-101 UP людей с установленной задержкой включения и не зависит от Инструкция по монтажу и настройки освещенности. Датчик присутствия Описани...»

«Руководство по эксплуатации. Автоматизированная система расчетов LANBilling версия 2.0 "Базовая" (сборка 006). ООО "Сетевые решения" 9 июля 2014 г. ООО "Сетевые решения", 2000-2013 Содержание Основные термины и определения, и...»








 
2017 www.doc.knigi-x.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные документы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.