WWW.DOC.KNIGI-X.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Различные документы
 

Pages:     | 1 |   ...   | 5 | 6 ||

«Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского Национальный исследовательский университет Всероссийская общественная организация ...»

-- [ Страница 7 ] --

Нижегородская государственная медицинская академия, Н.Новгород В данной работе был проведен анализ функциональной активности культур нейронов гиппокампа с помощью регистрации внеклеточных биопотенциалов параллельно по 64-м независимым каналам мультиэлектродной системы МЕД64 с высоким временным разрешением (10 кГц). На ранних днях развития культуры (5-7 день) активность представляет собой последовательности спонтанных некоррелированных импульсов (спайков). Разработан метод выделения импульсов (спайков) в структуре данных внеклеточной регистрации по порогу (амплитуде и длительности внеклеточного потенциала). Одной из основных проблем при анализе сигналов с внеклеточных электродов системы MED64 является достоверное детектирование импульсов электрической активности (спайков) с прилежащих к электроду нейрональных клеток и их компатментов. Это обусловлено сложными взаимодействиями в системе “клетка-электрод”, где рядом с регистрирующим электродом расположена совокупность нейронов разной формы с разными концентрациями рецепторов на мембране, взаимно искажающих суммарный электрический сигнал. Чаще всего для поиска спайков на электроде, снимающего активность с группы нейронов, применяют порог детектирования на основе стандартной квадратичной ошибки для отсечки фонового шумового сигнала. В проводимом исследовании были построены частотные характеристики детектирования спайков, на основе искусственно созданных активностей нейронов, построенных по фрагментам мультиэлектродных записей с известным количеством спайков.



Такая симуляция активности с заведомо известными информационными характеристиками позволила оценить различные варианты выбора порога. В исследовании этого вопроса был предложен новый метод детектирования на основе определения медианы статистических характеристик регистрируемого сигнала. Была проведена сравнительная оценка достоверности метода на основе стандартного отклонения и порога, определяемого медианой. Оказалось, что чувствительность предложенного метода выше, что приводит к возможности детектирования большего числа достоверных событий, поскольку порог детектирования становится менее чувствительным к частоте импульсных событий в канале. Также был разработан метод детектирования и сортировки спайков по вейвлет-коэффициентам, разделяющим сигналы от различных нейронов по форме импульса. Метод оценивает вэйвлет-коэффициенты любых спайков и выявляет различные типы спайков. Показано, что на ранних днях развития культуры от единичных нейронов регистрируются спайки классической формы с наличием периода гиперполяризации. В развитых сетях, генерирующих популяционные разряды, установлено наличие спайков различной формы положительной и отрицательной амплитуды в структуре берстов и между ними. Повторяемость импульсов сходной формы на электроде позволяет утверждать, что эти сигналы инициируются различными клетками (или их компартментами), расположенными в окрестности регистрирующего электрода или непосредственно на электроде (спайки положительной амплитуды).

Работа поддержана грантами РФФИ 08-02-00724, 08-04-97109, 2.1.1/6223 Минобр Науки и Программой МКБ РАН

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ БИОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ НИТРОЗИЛНЫХ ЖЕЛЕЗОСЕРНЫХ КОМПЛЕКСОВ

Полетаева Д.А., Смолина А.В., Мищенко Д.В., Руднева Т.Н., Котельникова Р.А.

Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка, daryazhokhova@gmail.com В последнее время нитрозильные железосерные комплексы привлекают особое внимание широкого круга исследователей, в том числе в области медицинской химии. В известной мере это обусловлено общностью молекулярных механизмов патогенетических процессов, основная роль в которых принадлежит генерации монооксида азота и супероксидных радикалов. К таким патологиям относятся: образование злокачественных опухолей,





БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

нейродегенеративные заболевания, такие как болезни Альцгеймера и Паркинсона, механизмы развития которых включают образование свободных радикалов. Нитрозильые железосерные комплексы обладают высокой вазодилататорной и гипотензивной активностью, способны подавлять агрегацию тромбоцитов и инициировать синтез стресс-белков, усиливающих защитные системы организма, при этом они, наряду с нитрозотиолами, единственно стабильными биорезервуарами монооксида азота.

В настоящей работе изучались молекулярные механизмы биологического действия нитрозильных железосерных комплексов на примере тринитрозильного комплекса железа (ТНКЖ) и цисаконита.

С помощью оригинального метода триплетных зондов исследовались мембранотропные свойства нитрозильных комплексов железа, было установлено, что ТНКЖ и цисаконит включаются в мембрану фосфатидилхолиновых липосом, накапливаются в ней, уменьшая при этом микровязкость гидрофобных сайтов липосомальной мембраны.

В работе оценивали влияние ТНКЖ и цисаконита на концентрацию МДА в липидах гомогенатов головного мозга кроликов, при спонтанном и инициированном окислении. Было показано, что ТНКЖ и цисаконит снижают концентрацию МДА и в том, и в другом случае, что свидетельствует об антиоксидантных свойствах нитрозильных железосерных комплексов.

Также было установлено, что ТНКЖ, цисаконит и монооксид азота обладают антирадикальной активностью, захватывая супероксидные радикалы. При этом эффективность антирадикального действия ТНКЖ выше, чем цисаконита и NO.

Обнаружен ингибирующий эффект ТНКЖ на каталитическую активность ферментов окислительного дезаминирования биогенных аминов – моноаминооксидаз А и В (МАО-А и МАО-В), что вместе с антиоксидантной активностью позволяет рассматривать соединение в качестве потенциального препарата нейропротекторного действия. Цисаконит проявил ингибирующее действие лишь в отношении МАО-А, что позволяет рассматривать его в качестве потенциального антидепрессанта.

БЕЛОК ТЕПЛОВОГО ШОКА 70 ЗАПУСКАЕТ РАЗЛИЧНЫЕ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ СИГНАЛЬНЫЕ

ПУТИ В КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ А431, А549 И HELA.

–  –  –

Как известно, существует множество методов стимуляции иммунного ответа. В настоящее время достаточно популярным стало исследование использования очищенного белка теплового шока 70(Hsp70) для стимуляции иммунного ответа. Во многих работах была показана активация клеток иммунной системы in vitro при воздействии на них Hsp70. На основании этих работ стали разрабатываться методы in vivo стимуляции иммунного ответа.

Целью нашей работы стало исследование активации различных сигнальных путей на клетки неиммунной природы при действии на них препарата очищенного Hsp70.

Для исследования использовали несколько типов клеточных культур: А431 -высокотрансформированные клетки эпидермальной карциномы человека; А549 – клетки карциномы легкого человека и HeLa – анеуплоидная линия эпителий - подобных клеток человека. Все они были получены из Российской коллекции клеточных культур (Институт цитологии УРАН). Для активации клеток использовали несколько лигандов: Hsp 70, липополисахарид (LPS - позитивный контроль), которыми обрабатывали клетки в концентрации 100нг/мл в течении 15 минут (время и концентрацию подбирали ранее).

Клетки выращивали в чашках Петри. Обработанные соответствующим образом клетки лизировали в буферном растворе (20mM Tris pH 7,5; 150mM NaCl; 2mM EDTA; 2mM DTT; 10% глицерол; 1% Triton X100; 1% NP40;

1mM ортованадат; 10нг/мл апротинин; 10нг/мл леупептин; 1mM PMSF). Белки лизатов разделяли электрофоретически, в 10% полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия и переносили на нитроцеллюлозную мембрану. Для выявления белков на иммуноблоте использовали антитела против ERK, STАT1, JNK, P38, NF-kB и их фосфорилированных форм (все антитела производства фирмы Cell Signaling, USA).

В результате проведенных работ выявили достоверные отличия в активации внутриклеточных сигнальных путей на разных клеточных культурах, что может свидетельствовать о выраженном влиянии Hsp70 не только на клетки иммунной системы. Полученные данные могут быть использованы для корректировки методов стимуляции иммунного ответа in vivo с использованием препаратов Hsp70.

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

ИЗМЕНЕНИЕ СПОНТАННОЙ КАЛЬЦИЕВОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙРОНОВ И АСТРОЦИТОВ ГИППОКАМПА КРЫС В ПЕРИОД ПОСТНАТАЛЬНОГО ОНТОГЕНЕЗА

–  –  –

Гиппокамп – это часть головного мозга, которая используется для хранения и обработки пространственной информации, а также участвует в процессе формирования долговременной памяти.

Для изучения функций гиппокампа важную роль играет анализ нейрон – астроцитарных взаимодействий. Таким образом, такие процессы, как обучение и память имеют очень сложные клеточные основы. Незрелый мозг имеет ряд особенностей, отличающих его от взрослого мозга. Прежде всего, эта особенность важна для процессов обучения. Обучение - есть результат опыта, а именно долговременное изменение нейронных связей после электрической активности нервных клеток. История открытия и изучения спонтанной активности клеток гиппокампа накопила большое число доказательств значимости данного рода активности. Однако, большинство работ в области изучения спонтанной активности у животных разного возраста сфокусированы на явном парадоксе так называемых «молчащих синапсов», присутствующих в раннем постнатальном периоде развития. Данный период развития мозга характеризуется наряду с продолжающимся синаптогенезом высокой пластичностью. В этом процессе важную роль играет повышенная возбуждающая нейропередача, опосредованная глутаматными рецепторами. У крыс она максимальна на второй неделе постнатального развития. У глиальных клеток (это электрически неактивные клетки мозга) можно наблюдать увеличения внутриклеточной концентрации кальция, выделяемого из внутриклеточных депо. Это позволило сделать предположение, что астроциты, возможно, интегрируют нейронную активность.

В данной работе сравнивалась спонтанная активность клеток переживающих срезов гиппокампа молодых (Р5 – Р14) и взрослых крыс (Р21 – Р33). Уровень кальция в клетках оценивался по уровню флуоресценции кальциевых красителей – Sulforhodamine 101 и Oregon Green 488 BAPTA 1-AM. Записи спонтанной активности клеток проводили в течение 30-60 минут на лазерном сканирующем микроскопе Zeiss LSM510 NLO Duoscan. Данные обрабатывались с помощью оригинального программного пакета ASTROSCANNER по последовательности флуоресцентных изображений. С помощью данного метода можно снимать спонтанную активность астроцитов стабильно в течение 2-х часов и более. Было установлено, что частота спонтанных кальциевых осцилляций увеличивается в период постнатального развития крыс. Также экспериментально доказано, что спонтанная активность нейронов и астроцитов коррелируют. Установленный факт, что число отростков астроцитов с возрастом увеличивается, подтверждает ранее полученные данные.

Работа поддержана РФФИ (08-02-00724, 08-04-97109, 09-04-01432, 09-04-12254-офи_м), 2.1.1/6223 Аналитическая ведомственная целевая программа "Развитие научного потенциала высшей школы (2009-2010 гг.)".

ИССДЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ НАСЫЩЕНИЯ КРОВИ КИСЛОРОДОМ В ХОДЕ ДЕЙСТВИЯ ЛУЧЕВОЙ И ХИМИОТЕРАПИИ МЕТОДОМ ОПТИЧЕСКОЙ

ДИФФУЗИОННОЙ СПЕКТРОСКОПИИ

Пряникова Т.И. 3, Орлова А.Г. 1, Масленникова А.В. 1,2, Голубятников Г.Ю. 1, Плеханов В.И. 1, Снопова Л.Б. 2, Иванова И.П. 2, Каменский В.А. 1, Шахова Н.М. 1, Турчин И.В. 1 Институт прикладной физики РАН, Н.Новгород, Нижегородская государственная медицинская академия, Н.Новгород, Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Н.Новгород, tatka-echo@mail.ru Состояние хронической гипоксии является характерной особенностью большинства солидных опухолей. Основным методом, используемым в настоящее время для оценки эффективности противоопухолевых агентов, является мониторинг изменений объема опухоли до и после лечения. Характерной чертой современной терапии является привлечение методов визуализации внутритканевых патологических процессов, таких, как УЗИ, компьютерная, магнитно-резонансная томография. Но большинство из этих методов не позволяют получать полную картину о физиологических свойствах опухолей, в частности, о степени ее оксигенации. Данная информация необходима при разработке методов, позволяющих преодолеть резистентность гипоксичных опухолей в отношении лечебных воздействий. В данной работе для оценки оксигенации опухоли предлагается метод опти

<

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

ческой диффузионной спектроскопии (ОДС). ОДС – метод визуализации, позволяющий получать информацию об уровне насыщения крови кислородом, отражающем кислородный статус тканей. Целью работы была оценка возможностей ОДС для исследования динамики степени StO2 в ткани опухоли в ходе химиотерапии и лучевой терапии. В работе использовалась установка, разработанная в ИПФ РАН (Нижний Новгород). В качестве источников используются лазеры (684, 790 и 850 нм). Сканирование осуществляется при синхронном пошаговом перемещении источника и детектора, расположенных в конфигурации «на просвет». По ОДС-данным рассчитывали двумерное распределение концентраций основных тканевых хромофоров (общий, окисленный, восстановленный гемоглобин) в зоне опухоли, а по их соотношению - уровень StO2. Для верификации полученных данных проводили гистологическое и иммуногистохимическое исследование срезов опухолей с использованием маркера гипоксии пимонидазол гидрохлорида.

Оценку зон распределения пимонидазола осуществляли методом лазерной сканирующей микроскопии. В эксперименте были использованы белые нелинейные крысы с перевитой подкожно опухолью лимфосаркомой Плисса. Для химиотерапии использовали препарат циклофосфан. Препарат вводили внутрибрюшинно однократно, в качестве контроля использовали интактных животных. В контрольном варианте по мере роста опухоли наблюдалось незначительное повышение уровня насыщения крови кислородом по сравнению с нелечеными животными. После введения циклофосфана скорость роста опухоли снижалась, на фоне чего наблюдалось повышение уровня насыщения крови. При лучевой терапии животных подвергали облучению дозой 10 Гр, в качестве контроля использовали необлученных животных. У облученных животных наблюдалось торможение роста опухоли и повышение уровня оксигенации. Таким образом, метод ОДС позволяет изучать динамику уровня кислородного статуса опухолей в ходе лучевой и химиотерапии.

ВЛИЯНИЕ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ СУЛЬФАТИРОВАННОЙ ЦЕЛЛЮЛОЗЫ НА АКТИВНОСТЬ

ФАКТОРОВ СВЕРТЫВАНИЯ – ТРОМБИНА И АКТИВИРОВАННОГО Х ФАКТОРА.

–  –  –

Гематологический научный центр РАМН, Москва, Elena-savchik3@yandex.ru Тромбозы развиваются в результате дисбаланса прокоагулянтных, антикоагулянтных и фибринолитических процессов в системе свертывания крови человека, отражающего сложное взаимодействие между генетическими или приобретенными факторами риска. Тромбоэмболические осложнения – распространенная медицинская проблема, связанная со значительной заболеваемостью и смертностью.

Для профилактики и лечения тромбозов наряду с антиагрегантами, прямыми фибринолитиками и антагонистами витамина К используют прямые антикоагулянты. К сожалению, используемые в настоящее время антикоагулянты прямого действия не удовлетворяют полностью потребности практической медицины, так как имеют ряд побочных эффектов и недостатков. В связи с этим значимым и перспективным является поиск фармакологических средств для профилактики и лечения тромбозов, а также быстрого и эффективного метода отбора наиболее активных соединений, в том числе и в ряду новых сульфатированных полисахаридов.

Получение, сульфатирование и анализ структуры образцов целлюлозы, выделенной из древесины осины, были осуществлены в лаборатории каталитической химии угля и биомассы Института химии и химической технологии СО РАН (Красноярск) научными сотрудниками Кузнецовой С.А. и Левданским А. В. Были исследованы 6 образцов сульфатированной целлюлозы с различной молекулярной массой (Mr, 12-19 kDa) и содержанием серы (S, 8,0-8,7%) на наличие антикоагулянтной активности (АК) и связи АК с подвижностью комплексов полисахаридов с поликатионом - сульфатом протамина в электрическом поле.

Определяли антитромбиновую (aIIa) и анти-фактор Ха (аХа) активности, что означает способность ингибировать фибриногенсвертывающую или амидолитическую активности сериновых протеаз свертывающей системы крови

– тромбина (фактор IIa) и фактора Ха, выраженную в единицах Международного стандарта НФГ. Проводили биоспецифичный электрофорез комплексов полисахаридов с поликатионом протамина сульфатом (ПС) в слое агарозы. В результате электрофореза наблюдали пики преципитации комплексов полианион-поликатион.

Образцы полисахаридов показали практически одинаковую антитромбиновую (45,6±1,0 - 53,8±6,8 Е/мг) и антифактор Ха (8,6±1,8-10,5±2,0 Е/мг) активности, кроме одного образца с молекулярной массой 14 kDa и содержанием серы 8,1 %. Данный полисахарид проявил наиболее низкую АК активность (аIIа=12,5 ±1,5 Е/мг, аХа=2,1±0,2 Е/мг). Размеры пиков преципитации (высота h и площадь S) значительно положительно коррелируют с аIIа и аХа активностями полисахаридов (raIIa-h=0,90-0,99; raXa-S=0,76-0,88). Значения аIIа и аХа умеренно положительно коррелируют с молекулярной массой полисахаридов (raIIa =0,37;

raXa =0,43) и содержанием серы в них (raIIa =0,44; raXa=0,25).

Таким образом, показано наличие связи между антикоагулянтной активностью соединений на основе сульфатированной целлюлозы и подвижностью их комплексов с сульфатом протамина в электрическом поле: чем выше АК активность образца, тем больше размеры его пиков преципитации, что может быть использовано для выявления наиболее активных полисахаридов.

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫЕ КЛЕТКИ ПУПОВИННОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ДЛЯ ТЕРАПИИ ИШЕМИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

–  –  –

Создание альтернативных методов лечения сердечно-сосудистых заболеваний, и в первую очередь, ишемического генеза является актуальной задачей современной регенерационной биомедицины. Одним из таких направлений могут стать методы молекулярного «шунтирования», предполагающие использование различных проангиогенных факторов для активации естественных процессов неоваскуляризации. Сочетание различных геннотерапевтических конструкций и клеточного носителя (генно-клеточная терапия) может рассматриваться как потенциально наиболее эффективная стратегия для индукции развития анатомо-функциональных сосудов, за счет комплексного действия составных факторов данной технологии.

Цель исследования – разработка методов лечения ишемии нижних конечностей с применением генномодифицированных клеток мононуклеарной фракции пуповинной крови человека.

Эксперименты проведены на половозрелых крысах линии Вистар массой 200–250 грамм. Ишемию задней конечности вызывали хирургическим методом. Клетки мононуклеарной фракции пуповинной крови человека выделяли центрифугированием в градиенте плотности фиколла. Клетки трансфецировали плазмидной ДНК pBudVEGF165-FGF2. Контролем служили клетки трансфецированные pBud-EGFP, и не трансфецированные клетки.

После трансфекции клетки инкубировали в течение 16-18 часов в культуральной среде. Увеличение экспрессии мРНК клонированных генов подтверждали методом ПЦР в реальном времени. Клетки вводили в зону ишемии.

Через 2 недели животных выводили из эксперимента, мышцы извлекали, фиксировали в нейтральном растворе формалина и заливали в парафин по стандартной методике. Гистологические срезы, окрашивали моноклональными антителами к HNA (ядерный антиген клеток человека), PCNA (ядерный антиген пролиферирующих клеток) или CD34 (маркер эндотелия и кроветворных стволовых клеток).

В результате иммуногистохимического окрашивания мышц голени мы выявили HNA-позитивные трансплантированные клетки человека. Окрашивание срезов на CD34 выявило позитивные эндотелиальные клетки в икроножной и камбаловидных мышцах, что в совокупности с данными исследования экспрессии HNA свидетельствует об способность клеток мононуклеарной фракции пуповинной крови дифференцировать в эндотелиальные клетки. При окраске срезов на PCNA в интактных образцах мышц голени крыс экспрессию PCNA наблюдали в единичных эндотелиальных клетках, в экспериментальных (pBud-VEGF165-FGF2) - в эндотелиальных клетках и единичных миобластах. При этом, наиболее выраженное увеличение пролиферирующих клеток обнаружили в популяции эндотелиальных клеток. Видимо, трансплантируемые клетки способны дифференцировать в эндотелиальные клетки, либо секретируют гуморальные факторы, стимулирующие пролиферацию эндотелия.

На основании полученных результатов можно заключить, что трансплантация модифицированных клеток мононуклеарной фракции пуповинной крови человека приводит к улучшению васкуляризации ишемизированной конечности путем стимуляции развития микроциркуляторного русла. Результаты свидетельствуют о целесообразности продолжения исследований предложенной стратегии терапии сосудистых заболеваний.

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ЭФФЕКТ ВНУТРИВЕННОГО И ВНУТРИМОЗГОВОГО ВВЕДЕНИЯ НЕЙРАЛЬНЫХ ПРОГЕНИТОРОВ И МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА НА ПАМЯТЬ

БУЛЬБЭКТОМИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ

–  –  –

Целью настоящей работы явилось исследование возможности лечения нейродегенеративного процесса альцгеймеровского типа с использованием ксенотрансплантации нейральных стволовых и прогениторных клеток, а также мезенхимальных стволовых клеток. Работа проведена на модели спорадической формы болезни Альцгеймера у бульбэктомированных (БЭ) мышей, демонстрирующих морфологические, биохимические, иммунологические и поведенческие проявления данной патологии, включая выраженные нарушения пространственной памяти. Ранее нами было установлено, что алогенная трансплантация ткани обонятельной луковицы, полученной из мозга эмбрионов мыши, в паренхиму фронтальной области неокортекса способствует восстановлению про

<

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

странственной памяти и сопровождается возрастанием числа нормально функционирующих клеток на фоне снижения нейронов с патологическими изменениями в височной коре и полях гиппокампа у БЭ животных.

Улучшение памяти у этих животных сопровождалось активацией нейрогенеза. Логическим продолжением наших исследований явилась попытка повлиять на память БЭ животных путем внутривенного или внутримозгового введения культуры нейральных стволовых и прогениторных клеток в сопоставлении с эффектами трансплантации мезенхимальных стволовых клеток плода человека, чему было посвящено данная работа.

Ксенотрансплантация таких клеток проводилась системно в хвостовую вену или кору мозга БЭ мышей на этапе манифестации у них патологического процесса альцгеймеровского типа. Контролем служили ложнооперированные животные, подвергавшиеся таким же введениям. Было проведено сравнительное исследование эффективности разных видов трансплантации. Полученные данные свидетельствуют о наличии более выраженного положительного эффекта на память БЭ мышей трансплантации культуры мезенхимальных стволовых клеток вне зависимости от способа введения, при этом БЭ мыши демонстрировали сохранную память и спустя 4 месяца после трансплантации культуры таких клеток. Полученные данные могут явиться основой для разработки нового перспективного подхода лечения БА на основе клеточной терапии.

ДИССОЦИИРОВАННЫЕ НЕЙРОНАЛЬНЫЕ КУЛЬТУРЫ. МАТЕМАТИЧЕСКИЕ МОДЕЛИ С ВНЕКЛЕТОЧНЫМ ОТВЕДЕНИЕМ.

–  –  –

Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Н.Новгород, simonov@neuro.nnov.ru Удобной моделью для изучения механизмов обработки информации, адаптивного поведения и обучения являются нейро-электронные системы, а именно диссоциированные нейрональные культуры, выращенные на мультиэлектродной матрице. Такой подход подразумевает использование регистрируемой активности нейрональной культуры для управления внешним устройством, реальным или виртуальным, и реализацию обратной связи с этим устройством для модификации активности сети с целью её обучения. Принципиально важным моментом здесь является разработка математической модели сети нейронов и исследование её динамики в процессе обучения.

Сравнение экспериментальных и модельных данных позволит сделать предположения о той или иной архитектуре сети, интерпретировать результаты эксперимента, корректировать экспериментальные протоколы. Для модельного описания диссоциированных нейрональных культур использовалась сеть синаптически связанных нейронов Ходжкина-Хаксли с учётом аксональных задержек. Скорость распространения потенциала действия от одной клетки к другой считается постоянной, таким образом, время задержки оказывается пропорциональным расстоянию между клетками. В таких сетях нейроны способны самоорганизовываться в многочисленные функциональные группы различной пространственной конфигурации.

В модели помимо мембранных потенциалов всех клеток возможно также регистрировать усреднённую полевую активность с некоторой области, что соответствует расположению в данной области металлического макроэлектрода. Вычисление потенциала на электроде производится на основе построения эквивалентных радиотехнических схем контакта поверхности электрода с близлежащими клетками. Для верификации адекватности предложенных моделей использовались записи многоэлектродной регистрации вызванных потенциалов, полученные с диссоциированных культур гиппокампа. Экспериментальные данные фильтровались от шумов, на основе порогового критерия с использованием методик сортировки спайков выделялся растр событий. Модельные реализации, полученные в данной работе, хорошо согласуются с экспериментом. В работе рассмотрена фундаментальная задача поиска соответствия между топологической и функциональной организацией нейронной сети. На основе результатов сопоставления многоэлектродных записей потенциала с диссоциированных культур гиппокампа и модельных реализаций можно подобрать архитектуру межклеточных взаимодействий в модели для определения реальной топологии нейрональной культуры.

Работа поддержана РФФИ (08-02-00724, 08-04-97109, 09-04-12254, 09-04-12304, 09-02-92611, 09-04-97090,) и программой МКБ Президиума РАН, Ведомственной целевой программой "Развитие научного потенциала высшей школы", проект 2.1.1/6223.

–  –  –

Локальная лазерная гипертермия - современный метод термического лечения онкологических заболеваний, основанный на нагреве опухоли до 41-47°С в течение десятков минут. Для обеспечения локального воздействия и повышения термочувствительности опухоли перспективным является применение плазмонно-резонансных золотых наночастиц. Целесообразно проводить гипертермию при максимальном содержании в опухоли наночастиц.

Для того, чтобы установить оптимальное время начала воздействия мы использовали метод оптической когерентной томографии (ОКТ), поскольку он чувствителен к изменению поглощающих и рассеивающих свойств биоткани.

Целью работы являлось прижизненное и неинвазивное исследование времени максимального накопления наночастиц в опухоли методом ОКТ для повышения эффективности проведения лазерной гипертермии опухолей.

Исследование выполнено на самках мышей линии CBA с опухолевой моделью рак шейки матки. Золотые наночастицы с плазмонным резонансом в области 800-950 нм, вводили внутривенно (108 частиц/животное). Накопление наночастиц в опухоли исследовали in vivo методом ОКТ по изменению интенсивности сигнала на изображениях, которые получали каждые 30 минут до достижения максимально высокого уровня ОКТ сигнала. Затем провели лазерную гипертермию: лазер 810 нм, 1.5Вт/см2, при 44-45°С в течение 20 минут, с непрерывным контролем температуры ИК-термографом. Противоопухолевый эффект лазерной гипертермии оценивали по торможению роста опухоли (ТРО, %). Верификацию наночастиц в опухоли выполняли методом электронной микроскопии.

Через 2-2,5 часа после инъекции наночастиц наблюдали постепенное возрастание сигнала на ОКТ – изображениях опухоли. Максимальный уровень сигнала отмечен через 4-5 часов после введения наночастиц. В этот период проведена лазерная гипертермия опухолей.

Анализ полученных термограмм показал, что нагрев опухоли с наночастицами происходил локально, без повышения температуры окружающих здоровых тканей. Нагрев опухоли с наночастицами до температуры 44 оС происходил за 3-3.5 минуты, а опухоли без наночастиц – за 10 минут. Для поддержания температуры в опухоли с наночастицами на постоянном уровне плотность мощности пришлось уменьшить с 1.5 Вт/см2 до 1.1 Вт/см2.

Торможение роста опухоли составило 66% на 5-е сутки после воздействия.

Методом электронной микроскопии золотые наночастицы были обнаружены как в цитоплазме опухолевых клеток рядом с митохондриями, так и внутри ядра.

В работе показана эффективность использования метода ОКТ для in vivo исследования накопления наночастиц в опухоли. Применение золотых наночастиц привело к локальному, быстрому нагреву опухоли при меньшей плотности мощности лазерного излучения. Данные ТРО демонстрируют положительный лечебный эффект.

Работа выполнена при финансовой поддержке Федерального агентства по науке и инновациям № 02.740.11.0713, грантов РФФИ (09-02-97072, 09-02-12215, 09-02-00539), грант президента МД-3018.2009.7.

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ РИСКА МАЛЫХ ДОЗ КОСМИЧЕСКОЙ РАДИАЦИИ В МОДЕЛЬНЫХ

ЭКСПЕРИМЕНТАХ НА МЫШАХ

Сорокина С.С., Заичкина С.И., Розанова О.М., Аптикаева Г.Ф., Смирнова Е.Н., Романченко С.П.

–  –  –

В последние годы в связи с активным освоением дальнего космоса, увеличением дальности и высоты авиаперелетов, поиском и использованием новых видов излучений для радиотерапии рака повышенный интерес исследователей вызывают биологические эффекты малых доз плотноионизирующей радиации. Известно, что при высотных полетах экипажи самолетов облучаются протонами и электронами радиационных поясов и галактическим космическим излучением. Помимо этого, существует риск острого облучения протонами солнечных вспышек.

Поэтому при увеличении частоты и дальности авиаперелетов создаются потенциальные условия для переоблучения экипажей, что может существенно повлиять на общую лучевую нагрузку и создать предпосылки для недооценки риска. Основные данные о влиянии космических излучений на человека накоплены при исследовании космонавтов и астронавтов после космических полетов. В эксперименте подобные результаты можно получить только с помощью моделирования радиационных нагрузок высотных полетов на ускорителях заряженных частиц.

Хроническое облучение самцов мышей линии SHK проводилось в поле излучения за верхней бетонной защитой Серпуховского ускорителя протонов с энергией 70 ГэВ (У-70 ИФВЭ, г. Протвино), моделирующего компонент

<

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

ный и спектральный состав высокоэнергетического радиационного поля, формируемого в атмосфере на высоте 10-30 км.

Наш постоянный интерес к изучению биологически значимых эффектов малых доз радиации с различными значениями линейной потери энергии требует таких подходов, как изучение дозовой зависимости, адаптивного ответа и генетической нестабильности – важных радиобиологических феноменов, существование которых нельзя было предсказать, исходя из эффектов, наблюдаемых при больших дозах облучения.

В результате проведенных экспериментов нами было показано, что исследованное низкоинтенсивное плотноионизирующее излучение приводит к значительному увеличению уровня цитогенетических повреждений по сравнению со спонтанным; не приводит к индукции радиационного адаптивного ответа; вызывает радиационноиндуцируемую генетическую нестабильность в потомстве облученных самцов; увеличивает скорость роста солидной формы асцитной карциномы Эрлиха. Кроме этого, цитогенетическими методами была выявлена возможность модуляции радиационного адаптивного ответа и генетической нестабильности с помощью варьирования мощности облучения и обработки родительских особей мышей такими иммуномодуляторами, как дибазол и хлористый кальций.

Эти результаты важны для понимания пусковых событий, приводящих к индукции генетической нестабильности, трансмиссии радиационно-индуцируемой генетической нестабильности от поколения к поколению, а также возможных механизмов защиты потомства от отдаленных эффектов малых доз плотноионизирующей радиации.

В практическом отношении полученные данные могут быть использованы для оценки радиационных рисков при долговременных высотных авиаполетах, при подготовке пилотируемых космических полетов, при работе персонала на высокоэнергетических ускорителях, а также для разработки теоретических основ адаптационной медицины.

ВЛИЯНИЕ НИТРОКСИЛЬНОГО РАДИКАЛА НА ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ ЦИСПЛАТИНА

Ступина Т.С.1, Конышев И.В.2, Комлева Н.В.3, Костюк Г.В.3, Сень В.Д. 3, Терентьев А.А. 3 Ивановский государственный университет, Иваново, stupina.tat@gmail.com Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Н.Новгород Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка Химиотерапия опухолей с применением цисплатина и его производных сопряжена с тяжелыми побочными эффектами, связанными с высокой токсичностью комплексов платины. Поэтому высокую актуальность имеют исследования, посвященные поиску новых противоопухолевых соединений или их комбинаций, которые позволяют снизить токсическую нагрузку на организм больного при сохранении высокой противоопухолевой активности.

Нитроксильные радикалы вызывают большой интерес, поскольку они могут выступать как самостоятельные противоопухолевые агенты и вместе с тем проявляют антиоксидантную активность. Антиоксидантные свойства могут быть использованы для снижения токсичности химиотерапии терапии.

Настоящая работа посвящена исследованию цитотоксичности цисплатина и нитроксильного радикала 4-аминотетраметилпиперидин-1-оксила. Цитотоксичность исследовалась как при их раздельном, так и при комбинированном применении. Влияние химических соединений и их комбинаций на клетки HeLa (аденокарцинома шейки матки человека) исследовали с помощью МТТ-теста. Клетки обрабатывали исследуемыми соединениями или их комбинациями, и через 24 ч окрашивали красителем МТТ. Из данных «доза-эффект» получали значения IC50. Для определения цитотоксических эффектов соединений в комбинации применяли алгоритм математического моделирования комбинационного индекса.

Цисплатин обладает высокой цитотоксичностью для клеток HeLa (IC50 составляет около 10 мкМ). Нитроксильный радикал проявляет цитотоксичность в очень высоких дозах (IC50 около 1.8 мМ). Нитроксильный комплекс платины, в котором нитроксильный радикал объединен с цисплатином, проявляет цитотоксичность с дозой IC50 около 100 мкМ. Исследование цитотоксических свойств комбинации цисплатина с нитроксильным радикалом показало, что эти два соединения являются сильными антагонистами.

В связи с известными антиоксидантными свойствами нитроксильных радикалов, сильный антагонизм цисплатина и нитроксильного радикала показывает, что цитотоксическое действие цисплатина во многом обусловлено его способностью вызывать в клетках окислительные повреждения, вероятно, за счет инактивации компонентов антиоксидантной системы. Полученные данные показывают также нецелесообразность применения этой комбинации в клинике. Однако введение нитроксильного радикала непосредственно в комплекс платины позволяет получить соединение с довольно высокой цитотоксичностью. Это предполагает возможность использования нитроксильного комплекса платины для противоопухолевой химиотерапии, поскольку он может иметь сниженную токсичность, либо отличаться от цисплатина профилем побочных эффектов.

Работа поддержана грантом РФФИ 09-03-01187а.

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ СЕРА-НИТРОЗИЛЬНЫХ КОМПЛЕКСОВ ЖЕЛЕЗА РАЗНОЙ СТРУКТУРЫ

–  –  –

Сера-нитрозильные комплексы железа (ЖСК) общей формулы [Fe2(SR)2(NO)4] являются аналогами природных соединений, обнаруженных у микроорганизмов, растений и млекопитающих. Являясь донорами оксида азота, [Fe-S] комплексы способны усиливать противоопухолевые эффекты известных цитостатиков, подавлять образование метастазов и активировать системы репарации ДНК на генетическом уровне. Кроме того, доноры оксида азота влияют на пролиферацию и гибель клеток. Таким образом, доноры оксида азота обладают высоким потенциалом для разработки на их основе терапевтических средств.

Настоящая работа посвящена исследованию влияния на опухолевые клетки новых сера-нитроксильных комплексов железа. Были исследованы комплексы с тетрагональным и гексагональным железо-серным ядром и с различными боковыми группировками R.

Исследование проводилось на клетках HeLa и H1299. Влияние на клетки исследовалось с помощью МТТ-теста:

клетки обрабатывали исследуемыми ЖСК, а затем окрашивали красителем МТТ. Интенсивность окрашивания измеряли спектрофотометрически. Для всех комплексов были получены кривые «доза-эффект» и вычислены дозы IC50.

Полученные данные показывают, что цитотоксичность ЖСК зависит от структуры комплексов и типа клеток.

Дозы IC50 варьируют от 10 до 200 мкМ. Наибольшей цитотоксичностью обладают два из исследованных ЖСК:

комплекс с фенильной и с этиламинной группировкой R. Замена этиламинной группировки на валин снижает цитотоксичность комплекса в несколько раз. Самую низкую цитотоксичность проявляет ЖСК с гексагональным железо-серным ядром.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОЛИФЕРАЦИИ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК КОРЫ БОЛЬШИХ

ПОЛУШАРИЙ НА ПОЛИМЕРНЫХ ПОВЕРХНОСТЯХ.

–  –  –

Нижегородская государственная медицинская академия, Н. Новгород, nansy.trifonova@mail.ru Последнее время все шире используются новые методы, основанные на применении клеточной трансплантологии и тканевой инженерии для восстановления утраченной структуры или функции органов и тканей. Такие методы подразумевают создание конструкций, состоящих из биосовместимого носителя (матрицы), осуществляющего структурную функцию, и клеточного наполнителя, который зависит от конечной области применения.

В связи с этим, целью данной работы явилось проведение сравнения пролиферативной способности и цитоструктурных особенностей культивируемых нейрональных клеток КБП на культуральном пластике и на матрице «Реперен».

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1) Приготовление диссоциированной культуры нейрональных клеток КБП 17-дневных эмбрионов белой беспородной мыши

2) Определение оптимальных условий подготовки матриц, при которых клетки проявляют наиболее здоровую морфологию и равномерное прикрепление

3) Анализ пролиферативной способности культуры в зависимости от материала подложки.

Материалы и методы: Материалом для исследования служили нейрональных клеток КБП 17-дневных эмбрионов белой беспородной мыши. Культура коры механически измельчалась и помещалась в 0,025% раствор трипсина на 20 минут для разрушения связей между клетками. Затем ткань несколько раз промывалась буферным раствором (PBS), ресуспензировалась в необходимом количестве питательной среды NBM1 (92,5% NBM, 5% FCS, 2% B27, 0,5% L-glutamin), Суспензия раскапывалась по 40 мкл на все чашки Петри и матрицу «Реперен», выдерживалась в инкубаторе 2 часа, после чего заливалась NBM1.

Жизнедеятельность культуры поддерживалась в условиях CO2 инкубатора. Смена среды производилась на первые сутки культивирования и в дальнейшем питательная среда по мере надобности с использованием NBM3.

Оценка цитоструктурных особенностей и динамики роста культур проводилась под инвертированным микроскопом DM1000 (Leica) Результаты. В конце первых суток культивирования большая часть жизнеспособных клеток прикрепилась к субстрату изолированно или небольшими группами во всех чашках Петри. Причем на матрице «Реперен» плотность культуры была выше, чем на пластике.

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

При сравнительном анализе данных микроскопирования была выявлена большая пролиферативная способность монослойной диссоциированной культуры на матрице «Реперен», чем на пластике. Наблюдалась большая плотность культуры, более развитая нейронная и глиальная сети.

Вывод: В данной работе показано, что полимерная механически прочная матрица «Реперен» обладает хорошей адгезивной способностью, лучше сохраняет прогениторные клетки, способствует их дифференцировке, стимулирует рост, что служит основанием для дальнейшего внедрения данного материала в клиническую практику.

КОМПЬЮТЕРНОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ВТОРИЧНОЙ И ТРЕТИЧНОЙ СТРУКТУРЫ НЕКОТОРЫХ

КАРБОГИДРАЗ

–  –  –

Проведено сравнение пространственных структур глюкоамилаз из Aspergillus awamori и Saccharomycopsis fibuligera. Построены модели белковых глобул ферментов с указанием положения функционально-значимых групп.

Анализ глюкоамилаз из микромицетов рода Aspergillus (A. niger, A. awamori X 100, A. awamori var. kawachi, A.

shirousami, A. оryzae) показал степень гомологии их аминокислотных последовательностей 86,1%. Установлено, что в состав консервативных областей полипептидных цепей входят остатки аспарагиновой и глутаминовой кислот, карбоксильные группы которых участвуют в разрыве гликозидных связей в молекуле крахмала, и остаток триптофана, выполняющий субстратсвязывающую функцию. При сравнении аминокислотных последовательностей глюкоамилаз из A. awamori и S. fibuligera выявлено, что они гомологичны на 39,2%. Путем компьютерного моделирования показано, что для одной субъединицы глюкоамилазы из A. awamori характерна плотная упаковка ядра в виде 13 спиралей, 11 -тяжей и 19 неупорядоченных участков. Обнаружено, что молекула глюкоамилазы из S. fibuligera включает 13 спиралей, 13 -тяжей и 23 аморфных участка. Анализ результатов, полученных методами компьютерного моделирования, ИК-спектрофотометрии, а также данных литературы, позволяет сделать заключение об упорядоченности глобул глюкоамилаз и отнести их к -спиральным белкам (43-46% остатков в спиралях, ~5% в -тяжах). С помощью программы MolScript на основе данных рентгеноструктурного анализа (http://www.RCSB.org/pdb) получена объемная модель молекулы глюкоамилазы из A. awamori X100. Показано, что активный центр фермента расположен в полости (~1,5 нм), ограниченной следующими аминокислотными остатками: Leu58, Leu130, Leu177, Leu319, Trp178, Trp417, Phe187. С одной стороны активного центра глюкоамилазы сосредоточены Asp55 и Glu179, а с противоположной – Glu400, карбоксильные группы которых осуществляют гидролиз -1,4-гликозидных связей крахмала. В состав активного центра фермента из S. fibuligera входит остаток Glu456, являющийся аналогом Glu400 в молекуле глюкоамилазы из A. awamori. Микроокружение активного центра, вероятно, образуют Gly467, Gly353, Ala468, Tyr63. Изучение пространственных моделей субъединиц молекул глюкоамилазы из A. awamori и S. fibuligera позволило выявить следующие черты сходства третичной структуры этих ферментов: 1) аналогичную плотную упаковку гидрофобного ядра; 2) положение активного центра в полости (щели), наличие в ней молекул воды; 3) участие в каталитическом акте карбоксильной группы Glu. Подобные результаты могут свидетельствовать о сходстве в механизмах катализа реакции гидролиза крахмала, осуществляемой изучаемыми ферментами. Исследование надмолекулярного уровня организации глюкоамилаз показало, что молекулы имели в своем составе 2 тождественные субьединицы с молекулярными массами 53,6 кДа. Таким образом, компьютерное моделирование структуры сложных олигомерных ферментов в сочетании с энзиматическими методами анализа и ИК-спектрофотометрией позволяет дать более корректную трактовку результатов исследования структурно-функциональных свойств карбогидраз и способствует выявлению молекулярных механизмов реакции гидролиза полимерных субстратов.

ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РАННИХ ЭМБРИОНОВ МЛЕКОПИТАЮЩИХ IN

VITRO С ПОМОЩЬЮ СИНТЕТИЧЕСКИХ -ЭНДОРФИНПОДОБНЫХ ПЕПТИДОВ

–  –  –

Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино, c.h.e.r.n.o.v@rambler.ru

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА

Известно, что 35% беременностей заканчивается гибелью эмбрионов еще до их имплантации в матку. Решить эту проблему возможно с помощью современных технологий ЭКО (экстракорпоральное оплодотворение) и ИКСИ (интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида). Одним из этапов этих методов является культивирование ранних эмбрионов in vitro. Для снижения процента гибели ранних эмбрионов и повышения их жизнеспособности на протяжении всего периода культивирования, необходимо проведение исследований, направленных на выявление факторов, определяющих развитие эмбрионов in vivo. Одним из факторов, влияющих на раннее развитие, является опиоидный нейропептид -эндорфин, который секретируется фолликулярными клетками и клетками эндометрия во время имплантации эмбриона. Целью данной работы было исследование влияния -эндорфина и -эндорфинподобных пептидов на раннее развитие эмбрионов мыши in vitro.

Нами было изучено действие -эндорфина, пентарфина (VKGFY) и циклопентарфина (cyclo(VKGFY)), на развитие 2-, 4- и 8-клеточных эмбрионов мыши. Работа была выполнена на мышах линии SHK, культивирование эмбрионов проводилось в среде М16 (Sigma, США) при 37оС и 5% СО2. Были исследованы физиологические концентрации пептидов (10-5 – 10-8М). Для определения механизма действия исследуемых пептидов в среду культивирования вводили налоксон - блокатор опиоидных рецепторов. Также было проведено исследование воздействия -эндорфина и пентарфина на изменение уровня внутриклеточного Са2+, с использование Са2+специфичного флуоресцентного зонда (Fluo-3 AM).

В ходе проделанной работы было установлено, что наиболее активным из всех исследуемых веществ является циклопентарфин (10-7М). Установлено, что при культивировании эмбрионов с исследуемыми пептидами увеличивается процент выживаемости эмбрионов, количество зрелых бластоцист и случаи выхода бластоцист из оболочек оплодотворения по сравнению с контролем. Исследования с налоксоном показали, что действие пептидов на ранние эмбрионы мыши осуществляется через неопиоидный рецептор -эндорфина. Отмечено, что в присутствии циклопентарфина наблюдалось ускорение развития эмбрионов, снижение числа аномально развитых эмбрионов, что свидетельствовало об отсутствии патологических процессов во время развития.

Было показано, что взаимодействие пентарфина с неопиоидным рецептором -эндорфина сопровождается выбросом Са2+ в цитоплазму. После добавления пентарфина происходило постепенное увеличение интенсивности свечения эмбрионов в первые 30 минут в среднем приблизительно на 50%, после чего наблюдался спад до контрольного значения. В случае с -эндорфином, наблюдали резкий скачок (в 1,5-2 раза) изменения уровня внутриклеточного Са2+ по сравнению с контролем, в течение 2 – 3 минут.

Таким образом, исследуемые пептиды могут выступать в роли неспецифических факторов роста, которые обеспечивают нормальное развитие ранних эмбрионов мыши. Было показано, что действие синтетических эндорфинподобных пептидов на ранние эмбрионы опосредованно через неопиоидные рецепторы -эндорфина.

-эндорфин, вызывая увеличение уровня внутриклеточного Са2+, стимулирует раннее развитие эмбрионов. Это воздействие осуществляется как через опиоидные, так и через неопиоидные рецепторы -эндорфина. Однако механизм действия через неопиоидные рецепторы до конца не ясен. Поэтому представляется интересным в

Pages:     | 1 |   ...   | 5 | 6 ||
Похожие работы:

«Содержание I. ЦЕЛЕВОЙ РАЗДЕЛ 1.1. Пояснительная записка 1.2. Планируемые результаты освоения обучающимися основной образовательной программы основного общего и среднего общего образования 1.2.1. Общие положения 1.2.2. Ведущие целевые установки и основные ожидаемые результаты 1.2.3. Планируемые результаты освоения учебных и междисциплинарных программ. 13 1.3. Система оценки достижения планируемых результатов освоения основной образоват...»

«Лекарство XXI века. Особенности пчелиной пыльцы ХуаШен. К долголетию люди стремятся, а долголетие перед глазами. Тот, кто познал секрет пыльцы, стал Богом так древний китайский поэт Лу Ю воспел секретный рецепт укрепления здоровья и достижения долголетия. Пыльца самцовая насле...»

«СОДЕРЖАНИЕ 1. Цель освоения дисциплины.. 3 2. Место дисциплины в структуре образовательной. 3 3. Компетенции обучающегося, формируемые в процессе освоения дисциплины.. 3 4. Содержание и структура дисциплины. 4 4.1. Объем дисциплины.. 4 4.2. Содержание дисциплины.. 4 4.3. Структура дисципли...»

«РУКОВОДСТВО ПО ЭКСПЛУАТАЦИИ ВИДЕОРЕГИСТРАТОРОВ Поддержка Без вирусов, Ваш архив Поддержка всех Пользуйтесь до 8Тб HDD без игр всегда доступен типов камер видеоаналитикой Оглавление ОГЛАВЛЕНИЕ Оглавление 1. Введение 1.1 Общие сведения 1.2 Меры предосторожности 2. Установка системы 2.1 Порядок действий при установке видеор...»

«Поиск и устранение неисправностей, связанных с потерями во входной и выходной очереди Интерактивный: в данном документе представлен анализ конкретного устройства Cisco. Содержание Общие сведения Предварительные условия Т...»

«Заготовки для любого сезона 100 лучших рецептов для вашей семьи 641/642 36.997 -14 Дизайн макета и серийного оформления Е. Ененко аоо. 100 :Э.—, 2014. — 128. — -14 (.). ISBN 978-5-699-72975-3 Э.,,,,.,, —,. УДК 641/642 ББК 36.997 © ООО " а ь о "Э о", 2014 ISBN 978-5-699-72975-3 ВСТУПЛЕНИЕ В маринованном виде можно...»

«Утверждено Приказом директора ООО "Телекомсервис" № 1 от "26" ноября 2015 г. В редакции, утвержденной Приказом Генерального директора ООО "Телекомсервис"" №1 от 26.11.2015; вступают в силу с 26.11.2015г. ПРАВИЛА РАБОТЫ СИ...»

«АУКЦИОН КЛАССИЧЕСКОЕ ИСКУССТВО 17 марта 2012 ДОНЕЦК ЛОТ 1 ПРЯНИШНИКОВ И. 6 ЛОТ БУРАЧЕК Н. 8 ЛОТ ГОРБАТОВ К. 24 ЛОТ BASTIN F. 31 ЛОТ ГЛУЩЕНКО Н. 102 АУКЦИОННЫЙ ДОМ "ЗОЛОТОЕ СЕЧЕНИЕ" АУКЦИОН №22 КЛАССИЧЕСКОЕ ИСКУССТВО 17 МАРТА 2012 Суббота 14:00 АДРЕС г. Донецк, ул. Челюскинцев, 189 ХВЦ "АртДонбасс" РЕГИСТРАЦИЯ,...»

«Курение и беременность Поздравляем вас с беременностью Все будущие родители хотят, чтобы их ребенок был умственно и физически здоровым. То время, пока ребенок находится во чреве матери, можно использоват...»

«Общество с ограниченной ответственностью Страховая компания "Цюрих" (ООО СК "Цюрих") "У Т В Е Р Ж Д Е Н О " Приказом №609 от 11" августа 2011г. Генеральный директор ООО СК "Цюрих" Н.И. Клековкин ПРАВИЛА страхования от несча...»

«221 В.И. Верёвкин, О.М. Исмагилова, Т.А. Атавин. Автоматизированное составление расписания. УДК 519.6 В.И. Верёвкин, О.М. Исмагилова, Т.А. Атавин Автоматизированное составление расписания учебных занятий вуза с учётом трудности дисциплин и утомляемости студентов Работа п...»








 
2017 www.doc.knigi-x.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные документы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.